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灭螺药物对钉螺和财鱼GOT酶活力及其蛋白表达的影响研究

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第一章 课题研究背景

1、NIC控制钉螺

1.1 药物控制钉螺是预防日本血吸虫病传播的主要方法

1.2 NiC是WHO唯一指定、我国常用的化学灭螺药物

1.3 NiC存在诸多的技术经济难点

2、取代NIC的灭螺药物研究

2.1 合成药物灭螺

2.2 植物源药物灭螺

2.3 现有研究成果的技术经济难点

3、2-DE在螺狮和鱼蛋白质表达研究中的应用

第二章 课题研究内容

1、使用药物

2、靶生物/蛋白

3、研究内容

4、研究意义

第三章 灭螺药物对钉螺和财鱼GOT酶活力影响研究

1 实验仪器、试剂和材料

1.1 实验仪器

1.2 实验试剂

1.3 实验材料

2 实验方法

2.1 GOT酶液制备

2.2 GOT酶液蛋白含量测定

2.3 GOT酶比活力测定

2.4 GOT酶催化最佳条件测定

2.5 GOT酶活力抑制测定

2.6 灭螺植物水提物制备

2.7 钉螺GOT酶对灭螺药物的敏感性测定

2.8 财鱼肝脏GOT酶对NiC的敏感性测定

3 结果与分析

3.1 钉螺GOT酶催化的最适条件与极差分析

3.2 钉螺GOT酶活力L25(56)的方差分析

3.3 灭螺药物与酶温孵对钉螺GOT酶活力影响的浓度效应

3.4 NiC浸泡染毒对钉螺GOT酶活力影响的经时效应

3.5 财鱼肝脏GOT酶催化的最适条件与极差分析

3.6 财鱼肝脏GOT酶活力的L25(5 6)方差分析

3.7 NiC与酶温孵对财鱼GOT酶活力影响的浓度效应

3.8 NiC与酶温孵对财鱼GOT酶活力影响的时间效应

3.9 NiC染毒对财鱼肝脏GOT酶活力的影响

第四章 NIC致财鱼肝脏蛋白质差异表达研究

1 仪器、试剂和材料

1.1 仪器设备

1.2 主要试剂

1.3 实验材料

2 实验方法

2.1 试剂配置

2.2 样品的制备

2.3 蛋白质含量测定

2.4 第一向固相pH梯度等点聚焦

2.5 第二向SDS-PAGE

3 实验结果及分析

参考文献

论文说明:略缩词

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致谢

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摘要

湖北钉螺是日本血吸虫的唯一中间宿主,药物灭螺能有效预控血吸虫病流行。NiC是WHO唯一指定、我国常用的化学灭螺药物,但存在水溶解度低、靶标/点的选择毒性差及价格昂贵等技术经济难点。因此,需要紧密结合预控血吸虫病的国家重大技术需求研发新型灭螺药物。本文以苯胺NiC和灭螺植物水溶性甾体皂甙/生物碱为供试药物,以钉螺和财鱼为靶标,探讨药物对其蛋白质表达和酶活力的影响,这为新型灭螺药物研发的先导物和特定靶点分选提供依据。
   1、钉螺软体和财鱼肝脏GOT酶催化最适条件的研究。
   通过L25(56)实验及极/方差分析,测得钉螺软体/财鱼肝脏匀浆液GOT酶催化最适条件分别在酶液浓度0.2/0.4mg/mL、底物浓度5.0/5.0μmol/L、反应体系pH7.5/8.0、反应时间60/20min及反应温度45/45℃时,其转氨基速率最高。提示物种间GOT酶催化动力学不同。这为灭螺药物对其活性影响研究提供实验依据。
   2、灭螺药物温孵/浸泡对钉螺和财鱼的GOT酶活力影响。
   2.1、药物温孵离体对钉螺软体的GOT酶活力。
   浓度效应:梯度质量数的NiC和吉祥草、黄果茄及盾叶薯蓣水提取物,分别与酶温孵20min,在其0.25、0.5、0.5及2.0mg/L的酶活力诱导率最高,分别达到19.3、23.7、18.9及11.52%,提示钉螺GOT酶对吉祥草甾体生物碱的敏感性最高。
   2.2、NiC温孵离体财鱼肝脏的GOT酶活力。
   浓度效应:梯度质量数的NiC分别与酶温孵30min,0.125mg/L NiC诱导率高达39.94%。
   时间效应:0.25mg/L NiC与酶经时温孵,40min温孵酶活力诱导率高达44.86%。
   2.3、NiC染毒财鱼肝脏的GOT酶活力。
   梯度质量的NiC浸泡染毒财鱼,1.5mg/L时财鱼死亡时间最短3.5h,GOT酶活力诱导率最大113.99%。
   提示NiC诱导GOT酶活力可能是其致死财鱼的靶点之一。
   3、NiC染毒对财鱼肝脏蛋白质表达影响。
   0.5mg/L NiC染毒财鱼48h,取肝脏,运用2-DE技术及PDQuest8.0.1软件分离分析,筛选出处理组有10个蛋白表达上调。这为NiC毒鱼机制及新型灭螺药物可能作用的特定靶蛋白提供一定的依据。

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