三肽囊素对环磷酰胺免疫抑制的阻断机制研究

摘要

本文研究了三肽囊素(BS)对环磷酰胺(CP)诱导的墟岗黄鸡免疫抑制的阻断作用及机制,旨在进一步证实三肽囊素的免疫增强作用,为三肽囊素作为一种新型免疫增强剂提供实验依据.180只一日龄墟岗黄母鸡随机分成对照组(Ⅰ)、环磷酰胺组(Ⅱ)、三肽囊素+环磷酰胺组(Ⅲ)和三肽囊素组(Ⅳ)四个组,每组设三个重复,每个重复15只鸡.在第4日龄和第7日龄时,第Ⅲ、第Ⅳ组每只鸡腿部肌肉分别注射0.01mg/kg体重的BS,同时第Ⅰ、第Ⅱ组鸡分别注射等量的生理盐水;第10日龄时,第Ⅱ组、第Ⅲ组分别注射40mg/kg体重的CP,同时第Ⅰ、第Ⅳ组分别注射等量的生理盐水.通过检测鸡只体重以及免疫功能的变化,研究BS和CP对鸡生长性能和免疫功能的影响.结果表明:1.在试验开始时,各组鸡体重的差异并不显著.14日龄时环磷酰胺组和环磷酰胺+三肽囊素组显著低于对照组和三肽囊素组.28日龄时,环磷酰胺组和环磷酰胺+三肽囊素组仍显著低于对照组和三肽囊素组,而三肽囊素组显著高于其它三个组.56日龄时,环磷酰胺+三肽囊素组鸡的生长速度逐渐恢复,且显著高于环磷酰胺组.结果表明BS对鸡的体重增加有一定的促进作用,CP对鸡的生长有明显的抑制作用,BS可部分拮抗这种抑制作用.2.Ⅱ组和Ⅲ组鸡的法氏囊指数、胸腺指数和脾脏指数低于或显著低于Ⅰ和Ⅳ组,且以Ⅱ组最低.Ⅱ组鸡的胸腺小体体积小且数量少;法氏囊的淋巴滤泡明显缩小,皮质和髓质的界限不清,淋巴细胞明显减少或消失;脾脏脾小体比对照组的要小,生发中心不明显.Ⅲ组鸡的胸腺小体和脾小体数量多于Ⅱ组,法氏囊皮质和髓质界限清楚,淋巴细胞数多于Ⅱ组.Ⅳ组鸡的胸腺细胞、胸腺小体以及法氏囊内淋巴细胞明显增多,在脾脏中可见较多的脾小体,且随着日龄的增长生发中心增多.结果提示:CP可明显抑制法氏囊、胸腺和脾脏的发育,损伤免疫器官的组织结构,而BS可阻断CP的抑制作用.3.环磷酰胺组和三肽囊素+环磷酰胺组红细胞总数在56日龄时显著低于对照组和三肽囊素组,且以环磷酰胺组最低.14日龄和35日龄时,环磷酰胺组的RBC-R1花环率显著低于或低于其它三组,而RBC-IC花环率却高于其它三组.提示,三肽囊素可增加红细胞数量,提高红细胞免疫功能,且可部分抵抗环磷酰胺抑制红细胞免疫功能的作用.4.在14日龄时,Ⅱ组鸡血浆中γ-球蛋白含量显著低于其它三组(P<0.05).在35日龄时,Ⅱ组仍显著低于其它三组,而Ⅳ组显著高于其它三组.5.在14、35和56日龄时Ⅳ组外周血液淋巴细胞增殖转化明显高于其他三组,且差异显著(P<0.05).在14、35日和56龄时,Ⅱ组血浆IL-2含量显著低于其它三组,且差异显著(P<0.05),而Ⅲ组、Ⅳ组与Ⅰ组差异不显著.6.利用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dTUP缺口末端标记法(TUNEL)对三肽囊素和环磷酰胺后不同日龄鸡的免疫器官细胞凋亡进行计数.结果表明:各日龄段,环磷酰胺组凋亡细胞数均高于或显著高于其它三组,而三肽囊素组的细胞凋亡数最低.

目录

文摘

英文文摘

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前言

1.材料与方法

1.1饲养试验

1.1.1试验动物的分组与处理

1.1.2试验动物的饲养管理

1.1.3试验日粮

1.1.4采样及样品处理方法

1.2墟岗黄鸡生长性能的测定

1.3墟岗黄鸡免疫器官指数的测定及组织结构的观察

1.3.1免疫器官发育的测定

1.3.2组织结构观察

1.4墟岗黄鸡红细胞免疫功能的测定

1.4.1红细胞总数的测定

1.4.2 RBC(红细胞C3B受体花环率)和RBC-IC（红细胞免疫复合物花环率）花环实验

1.5墟岗黄鸡血浆蛋白组分的测定

1.5.1原理

1.5.2实验器材

1.5.3试剂配制

1.5.4操作方法

1.5.5计算方法

1.6墟岗黄鸡T淋巴细胞增殖转化实验

1.6.1实验原理

1.6.2材料与试剂

1.6.3主要设备

1.6.4操作步骤

1.7墟岗黄鸡血浆IL-2水平的测定

1.7.1测定原理

1.7.2主要设备

1.7.3操作步骤

1.8墟岗黄鸡胸腺、法氏囊和脾脏细胞凋亡的测定

1.8.1主要试剂

1.8.2操作步骤

1.8.3凋亡指数(％)的计数

1.9数据统计处理

2.实验结果与分析

2.1三肽囊素和环磷酰胺对墟岗鸡生长性能的影响

2.1.1三肽囊素和环磷酰胺对墟岗鸡增重的影响

2.1.2三肽囊素和环磷酰胺对墟岗鸡饲料转化率的影响

2.2三肽囊素和环磷酰胺对墟岗鸡的免疫器官发育的影响

2.2.1三肽囊素和环磷酰胺对墟岗鸡法氏囊指数的影响

2.2.2三肽囊素和环磷酰胺对墟岗鸡胸腺指数的影响

2.2.3三肽囊素和环磷酰胺对墟岗鸡脾脏指数的影响

2.3三肽囊素和环磷酰胺对墟岗鸡免疫器官组织结构的影响

2.3.1三肽囊素和环磷酰胺对墟岗鸡法氏囊组织结构的影响

2.3.2三肽囊素和环磷酰胺对胸腺组织结构的影响

2.3.3三肽囊素和环磷酰胺对脾脏组织结构的影响

2.4三肽囊素和环磷酰胺对墟岗黄鸡红细胞免疫功能的影响

2.4.1三肽囊素和环磷酰胺对墟岗环鸡红细胞总数的影响

2.4.2三肽囊素和环磷酰胺对墟岗环鸡免疫功能的影响

2.5三肽囊素和环磷酰胺对鸡血浆蛋白组分的影响

2.6三肽囊素和环磷酰胺对鸡淋巴细胞增殖与转化的影响

2.6.1三肽囊素和环磷酰胺对鸡脾脏淋巴细胞增殖与转化的影响

2.6.2三肽囊素和环磷酰胺对鸡外周血淋巴细胞增殖转化的影响

2.7三肽囊素和环磷酰胺对墟岗黄鸡血液IL-2水平的影响

2.8三肽囊素和环磷酰胺对墟岗黄鸡免疫器官细胞凋亡的影响

2.8.1三肽囊素和环磷酰胺对墟岗黄鸡法氏囊细胞凋亡的影响

2.8.2三肽囊素和环磷酰胺对墟岗黄鸡胸腺细胞凋亡的影响

2.8.3三肽囊素和环磷酰胺对墟岗黄鸡脾脏细胞凋亡的影响

3讨论

3.1三肽囊素和环磷酰胺对生长性能和饲料转化率的影响

3.2三肽囊素和环磷酰胺对鸡免疫器官指数和组织结构的影响

3.2.1三肽囊素和环磷酰胺对免疫器官指数的影响

3.2.2三肽囊素和环磷酰胺对免疫器官组织结构的影响

3.3三肽囊素和环磷酰胺对墟岗黄鸡红细胞免疫功能的影响

3.4三肽囊素和环磷酰胺对鸡血浆蛋白组分的影响

3.5三肽囊素和环磷酰胺对墟岗黄鸡细胞免疫功能的影响

3.6三肽囊素和环磷酰胺对墟岗黄鸡免疫器官细胞凋亡的影响

4结论

参考文献

致谢

作者简历

附图