小鼠软骨内成骨过程中软骨细胞发育与淋巴管生长的研究

摘要

目的:
　　本论文通过观察软骨细胞Ⅱ型胶原，以研究软骨细胞在软骨内成骨过程中的发育情况，并通过检测淋巴管内皮细胞标志物LYVE-1与促淋巴管生长因子VEGF-C的表达，阐明软骨内成骨过程中VEGF-C对软骨成骨过程中淋巴管生长发育的影响，并分析了淋巴管与软骨内成骨的关系，并为软骨内成骨过程以及生长软骨损伤的修复提供理论参考，也对青少年骨的健康发育有着积极意义。
　　方法:
　　取昆明小鼠第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19天日龄仔鼠的双侧股骨，采用HE染色法观察股骨软骨发育过程中软骨细胞形态变化和血管侵入情况，运用免疫组织化学法观察股骨中Ⅱ型胶原、LYVE-1的表达情况，利用RT-PCR检测Ⅱ型胶原、LYVE-1和VEGF-C表达。
　　结果:
　　1.股骨生长发育过程表现为软骨内成骨，仔鼠出生前股骨初级骨化中心已形成，次级骨化中心尚未形成。
　　2.第7天血管侵入骨骺，次级骨化中心开始形成。随着日龄增大次级骨化中心不断扩大，第13天骨骺生长区大量血管侵入，软骨外基质大面积钙化，第19天血管侵入减少，但骨骺仍未完全钙化。
　　3.伴随软骨细胞的增殖分化，Ⅱ型胶原主要在增殖和肥大软骨细胞上表达。LYVE-1肥大软骨细胞与成骨区表达。Ⅱ型胶原随着日龄增大，表达量呈现升高趋势，第15天后开始下降。LYVE-1mRNA在第5天与13天表达呈上升趋势。VEGF-CmRNA表达与LYVE-1mRNA表达呈正相关，整体趋势基本保持一致。
　　结论:
　　1.股骨骨化表现为软骨内成骨，初级骨化中心与次级骨化中心软骨发育有差异，次级骨化中心无软骨细胞肥大期。
　　2.股骨内骨化过程中有毛细淋巴管存在，且主要存在于软骨细胞肥大区与成骨区。
　　3.血管生长因子VEGF-CmRNA变化趋势与LYVE-1mRNA呈正相关，与淋巴管生长变化一致。

目录

声明

摘要

1．引言

2．文献综述

2．1 软骨内成骨

2．1．1 软骨细胞

2．1．2 软骨外基质与Ⅱ型胶原

2．1．3 软骨细胞的增殖与分化

2．1．4 软骨细胞的成熟

2．1．5 生长因子与转录因子的调控

2．1．6 血管侵入

2．2 淋巴管

2．2．1 淋巴管的生长与功能

2．2．2 淋巴管内皮细胞标志物

2．2．3 促淋巴管内皮细胞生长因子

3．实验材料和实验方法

3．1 实验器材与主要试剂

3．1．1 实验器材

3．1．2 主要试剂

3．2 实验方法

3．2．1 动物模型

3．2．2 HE染色

3．2．3 RT-PCR

3．2．4 数据分析

4．实验结果

4．1 HE染色结果

4．2 Ⅱ型胶原蛋白在不同日龄仔鼠股骨中的表达

4．3 LYVE-1蛋白在不同日龄仔鼠股骨中的表达

4．4 CollagenⅡmRNA、LYVE-1 mRNA、VEGF-CmRNA在不同日龄仔鼠股骨中的表达

5．讨论与分析

5．1 软骨内成骨过程中软骨细胞发育与Ⅱ型胶原的表达

5．2 软骨内成骨过程中LYVE-1的变化与软骨外基质的重建

5．3 VEGF-C对淋巴管生长的影响

6 结论

7．展望

参考文献

致谢