湖北乡土杨树种质资源组培繁殖保存研究

摘要

湖北乡土杨树资源丰富，但缺乏有效的收集保存和利用。因此，对其开展种质资源组培繁殖保存很有必要。本文对银白杨和山杨2个湖北乡土杨树的组培快繁、种质缓慢生长保存及遗传稳定性进行研究，建立其组培快繁及中长期离体保存技术体系，以期为湖北乡土杨树种质资源的离体保存提供理论与技术基础，对于促进湖北杨树产业的健康发展具有重要意义。主要研究结果如下：
　　1.组培快繁体系的建立
　　（1）外植体消毒：用0.1%HgCl2消毒，银白杨和山杨带腋芽茎段的最佳消毒时间都为8min，污染率分别为8.33%、5.21%，褐化率分别为9.38%、27.08%；叶片的消毒时间都以6min最好，污染率分别为8.33%、3.13%，褐化率分别为4.17%、7.29%。
　　（2）带腋芽茎段萌发：银白杨的最佳培养基为MS+0.3mg/L6-BA+0.05mg/L NAA，萌发率为80.56%，平均芽高1.91cm；山杨的最佳培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.05mg/L NAA，萌发率为80.56%，平均芽高2.09cm。
　　（3）外植体直接诱导不定芽：银白杨叶片直接诱导不定芽的最佳培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.05mg/L NAA+0.01mg/L TDZ，诱导率为86.11%，每个外植体平均分化4.13个芽；山杨叶片直接诱导不定芽的最佳培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA，诱导率为90.28%，每个外植体平均分化4.95个芽；山杨叶柄直接诱导不定芽的最佳培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.1mg/LNAA，诱导率为91.67%。
　　（4）继代增殖：银白杨的最佳培养基为MS+0.1mg/L6-BA+0.05mg/L NAA，增殖倍数6.12；山杨的最佳培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.05mg/L NAA，增殖倍数6.37。
　　（5）壮苗培养：2种杨树均可在不添加激素的MS培养基上实现壮苗。
　　（6）生根培养：银白杨的最佳培养基为1/2MS+0.05mg/L NAA，生根率100%，平均根数4.43条，平均根长3.42cm；山杨的最佳培养基为1/2MS+0.1mg/L IBA，生根率100%，平均根数5.23条，平均根长4.48cm。
　　2.缓慢生长离体保存研究
　　（1）60g/L蔗糖较适宜银白杨、山杨缓慢生长保存，保存4个月后存活率都为100%，银白杨平均株高1.75cm，山杨平均株高2.78cm。
　　（2）2mg/L的多效唑较适宜银白杨、山杨缓慢生长保存，保存4个月后存活率都为100%，银白杨平均株高2.63cm，山杨平均株高2.38cm。
　　（3）20g/L的甘露醇比较适合山杨缓慢生长保存，保存4个月后存活率为100%，平均株高为2.93cm。
　　（4）60mg/L的矮壮素较适于山杨缓慢生长保存，保存4个月后存活率为100%，平均株高为2.45cm。
　　（5）脱落酸不适合两种杨树的缓慢生长保存。甘露醇、矮壮素不适合银白杨缓慢生长保存。
　　3.遗传稳定性分析采用ISSR分子标记，对组培苗进行遗传稳定性分析，每种杨树不同继代次数的组培苗和对照相比，在带型上都无差异，说明经过多次继代培养后，组培苗未发生变异，仍能保持遗传的稳定性。

目录

声明

缩略词表

1.前言

1.1 湖北乡土杨树概述

1.2 杨树组织培养研究现状

1.2.1 杨树组织培养研究进展

1.2.2 杨树组织培养中的影响因子

1.3 植物种质资源保存研究

1.3.1 植物种质离体保存方法

1.3.2 保存材料的遗传稳定性研究

1.3.3 再生植株遗传变异的鉴定方法

1.3.4 分子标记在杨树中的应用

1.4 本研究的目的意义、研究内容及技术路线

1.4.1 目的及意义

1.4.2 研究内容

1.4.3 研究的技术路线

2.1 材料与方法

2.1.1 试验材料

2.1.2 培养条件及基本培养基

2.1.3 试验方法

2.1.4 试验结果统计与数据分析

2.2 结果与分析

2.2.1 外植体消毒试验结果

2.2.2 腋芽萌发试验结果

2.2.3 外植体直接诱导不定芽试验结果

2.2.4 继代增殖试验结果

2.2.5 生根培养试验结果

2.3 结论与讨论

2.3.1 结论

2.3.2 讨论

3.1 材料与方法

3.1.1 试验材料

3.1.2 试验方法

3.1.3 试验结果统计与数据分析

3.2 结果与分析

3.2.1 蔗糖浓度对组培苗缓慢生长离体保存的影响

3.2.2 甘露醇浓度对组培苗缓慢生长离体保存的影响

3.2.3 脱落酸浓度对组培苗缓慢生长离体保存的影响

3.2.4 矮壮素浓度对组培苗缓慢生长离体保存的影响

3.2.5 多效唑浓度对组培苗缓慢生长离体保存的影响

3.3 结论与讨论

3.3.1 结论

3.3.2 讨论

4.1 实验材料与方法

4.1.1 实验材料

4.1.2 实验仪器及主要试剂

4.1.3 实验方法

4.2 结果与分析

4.2.1 DNA提取与质量检测结果

4.2.2 ISSR检测结果分析

4.3 结论与讨论

4.3.1 结论

4.3.2 讨论

参考文献

图版

致谢