油菜BnSGS3基因对植物生长发育及抗病性的影响

摘要

基因沉默是一种天然的抗病毒机制，Suppressor of gene silencing3（SGS3）基因编码的产物是介导植物Post-transcriptional gene silencing(PTGS)过程的核心蛋白，拟南芥AtSGS3和番茄SISGS3基因具有天然的抗病毒功能。本研实验室得到了一条油菜BnSGS3基因:通过Southern blot检测得到了不同油菜品种中BnSGS3的拷贝数;将BnSGS3潞过表达载体和干扰表达载体通过农杆菌介导法转化到Columbia野生型拟南芥中，并对其进行病毒抗性鉴定;通过调查转基因拟南芥不同生长时期的改变，以及对油菜BnSGS3干扰表达的转基因油菜接种核盘菌、灰霉菌进行抗性鉴定，明确此基因的改变是否影响了植物的生长发育。研究主要结果如下:
　　1、Southern blot检测的中双六号和苏油一号油菜植株中BnSGS3拷贝数都为1个单拷贝;BnSGS3过表达和干扰表达的转基因油菜单株中外源基因分别表现出不同的拷贝数，但最高不超过3，最低为1。
　　2、农杆菌转化拟南芥通过除草剂筛选和PCR鉴定，得到BnSGS3过表达和干扰表达的转基因拟南芥阳性植株T0代各30株;转基因和非转基因拟南芥病毒接种试验中，过表达BnSGS3的转基因拟南芥只对CMV表现出了抗性;干扰表达BnSGS3的转基因拟南芥的抗病性与野生型没有差异。
　　3、BnSGS3转化的拟南芥植株和油菜植株在表型上与正常植株有很大的差异，转基因植株苗期瘦弱，叶片呈现无规律性疯长，相较于非转基因植株叶片颜色更浅，这些在表型上有异样的转基因植株不仅仅表现出了对病毒抗性的改变，其对其他病害的抗病性也有所变化;油菜BnSGS3干扰表达植株真菌接种试验中，转基因植株相对于对照组表现出了病害加重的症状，表明BnSGS3基因在油菜中的干扰降低了植株对腐生型真菌的抗性。

目录

声明

摘要

第一章 文献综述

1 油菜主要病毒的研究现状

1．1 芜菁花叶病毒

1．2 黄瓜花叶病毒

1．3 油菜花叶病毒

2 植物抗病毒病的分子机制研究

2．1 植物对病毒的天然抗性

2．2 病原物介导的抗性

2．3 基因沉默现象

3 植物中的SGS基因

3．1 SGS3基因的抗病毒研究

3．2 SGS3基因的结构特点

4 转基因拟南芥研究概况

4．1 拟南芥遗传转化方法的发展

4．2 转基因拟南芥的筛选

5、基因沉默与生长发育

6、本研究的目的与意义

第二章 不同油菜品种中BnSGS3的拷贝数测定

1 材料与方法

1．1 试验材料

1．2 试验方法

2 结果与分析

2．1 探针标记效率检测分析

2．2 Southern blot鉴定

3 结论与讨论

第三章 BnSGS3基因遗传转化拟南芥及转基因植株病毒接种鉴定

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 阳性农杆菌转化子的PCR检测分析

2．3 农杆菌转化拟南芥分析

2．4 转基因拟南芥筛选分析

2．5 转基因拟南芥PCR检测

2．6 转基因拟南芥人工接种病毒分析

3 结论与讨论

第四章 BnSGS3基因对植物生长发育和抗病性的影响

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 不同处理拟南芥植株生长差异对比分析

2．2 油菜BnSGS3-SI转基因植株真菌接种试验分析

3 结论与讨论

参考文献

致谢