鼠伤寒沙门氏菌刺激对鸡十二指肠上皮细胞增殖与凋亡的影响

摘要

小肠不仅是一个消化和吸收的场所，也是一个机体免疫的场所。小肠上皮细胞的增殖和凋亡的动态平衡，维持了肠黏膜屏障的完整性。临床上沙门氏菌感染诱导肠炎，导致小肠上皮细胞的凋亡和增殖产生紊乱，小肠功能遭到破坏。哺乳动物中研究发现，沙门氏菌细胞壁的主要成分脂多糖(Lipopolysacride，LPS)可激活TLR4信号通路，促进小肠上皮细胞凋亡，同时抑制细胞增殖。然而，关于沙门氏菌感染时TLR4对鸡小肠上皮细胞增殖与凋亡的影响还未见相关报道。因此，本研究以1日龄科宝肉鸡为研究对象，采用LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激诱导鸡十二指肠上皮细胞的增殖与凋亡平衡紊乱，研究TLR4在鸡十二指肠内的分布及表达变化规律，探索TLR4与鼠伤寒沙门氏菌感染破坏肠上皮细胞增殖与凋亡平衡间的关系。主要研究内容和结果如下:
　　1.LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激对鸡十二指肠上皮细胞增殖的影响为了研究沙门氏菌刺激对鸡十二指肠上皮细胞增殖的影响，本试验采用LPS刺激模拟细菌感染，或采用鼠伤寒沙门氏菌感染，采用免疫组织化学染色技术，分别研究了LPS刺激或鼠伤寒沙门氏菌刺激后PCNA在鸡十二指肠内的分布及表达变化规律。研究结果显示:PCNA主要分布于十二指肠的黏膜层，在黏膜下层、肌层和浆膜层也有分布，主要分布于细胞核中。黏膜层的上皮、固有层及肠腺附近分布有大量的阳性细胞。LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激后鸡十二指肠内PCNA的表达量均降低。与对照组相比，LPS刺激后12h、72h和120h时，PCNA表达量显著降低(p＜0.05);鼠伤寒沙门氏菌刺激后6h、12h、24h、36h、72h和120h时，PCNA的表达量均显著降低(p＜0.05)。以上研究结果表明，当鼠伤寒沙门氏菌侵入机体时，抑制肠上皮细胞增殖，损伤肠黏膜屏障功能。
　　2.LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激对鸡十二指肠上皮细胞凋亡的影响为了研究沙门氏菌刺激对鸡十二指肠上皮细胞凋亡的影响，本试验采用LPS刺激模拟细菌感染，或采用鼠伤寒沙门氏菌感染，采用免疫组织化学染色技术，分别研究了LPS刺激或鼠伤寒沙门氏菌刺激后anti-DNA在鸡十二指肠内的分布及表达变化规律。研究结果显示:凋亡细胞主要分布于十二指肠的黏膜层，在黏膜下层、肌层和浆膜层也有分布。黏膜层的上皮、固有层及肠腺附近分布有大量的阳性细胞。LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激后鸡十二指肠内anti-DNA的表达量均升高。与对照组相比，LPS刺激后12h和24h时，细胞凋亡显著增强(p＜0.05);鼠伤寒沙门氏菌刺激后12h、24h和36h时，细胞凋亡显著增强(p＜0.05)。以上研究结果表明，当鼠伤寒沙门氏菌入侵机体时，促进肠上皮细胞凋亡，破坏肠黏膜屏障功能。
　　3.LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激对鸡十二指肠内TLR4表达的影响为了研究沙门氏菌刺激对鸡十二指肠上皮细胞内TLR4的影响，本试验采用LPS刺激模拟细菌感染，或采用鼠伤寒沙门氏菌感染，采用免疫组织化学染色和Q-PCR技术，分别研究了LPS刺激或鼠伤寒沙门氏菌刺激后TLR4在鸡十二指肠内的分布及表达变化规律。研究结果显示:TLR4主要分布于十二指肠的黏膜层，在黏膜下层、肌层和浆膜层较少分布。黏膜层的上皮、固有层及肠腺附近分布有大量的阳性细胞。LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激后鸡十二指肠内TLR4的表达量均升高。与对照组相比，LPS刺激后2h、12h和72h时，TLR4的表达量显著增多(p＜0.05);鼠伤寒沙门氏菌刺激后6h、12h、24h、36h和72h时，TLR4的表达量显著增多(p＜0.05)。以上研究结果表明，当鼠伤寒沙门氏菌侵入机体时，可通过激活TLR4来破坏十二指肠上皮细胞增殖与凋亡平衡，影响肠黏膜屏障功能。

目录

声明

论文说明

摘要

缩略语表

1 前言

1．1 立题背景

1．2 文献综述

1．2．1 沙门氏菌病对养鸡生产的危害

1．2．2 沙门氏菌感染对小肠上皮细胞及增殖与凋亡的影响

1．2．3 沙门氏菌感染时TLRs作用

1．2．4 TLRs在维持小肠上皮细胞增殖与凋亡平衡中的作用

1．2．5 本研究的目的和意义

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 试验动物及处理

2．1．2 主要仪器

2．1．3 主要试剂

2．1．4 主要溶液和试剂的配制

2．2 试验方法

2．2．1 样品采集与处理

2．2．2 石蜡切片制作

2．2．3 免疫组织化学染色

2．2．4 细胞凋亡检测

2．2．5 荧光定量PCR

2．2．6 数据统计分析

3 结果

3．1 各实验组雏鸡剩余情况

3．2 LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激对鸡十二指肠内PCNA表达的影响

3．3 LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激对鸡十二指肠上皮细胞凋亡的影响

3．4 LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激对鸡十二指肠内TLR4表达的影响

4 讨论

4．1 LPS或鼠伤寒沙门氏菌剌激对鸡十二指肠肠上皮细胞的增殖与凋亡的影响

4．2 LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激对鸡十二指肠肠上皮细胞的TLR4的影响

结论

参考文献

致谢

附录1 个人简历

附录2 发表论文情况