老鹰茶抗氧化活性物质基础研究

摘要

老鹰茶由于其具有清热解毒的功效而在民间具有悠久的饮用历史，目前关于老鹰茶清热解毒的物质基础与作用机理仍不明确。有研究表明，中药材的清热解毒是通过抗氧化、抗病毒、抗炎症等发挥作用。
　　本课题以老鹰茶为研究对象，从天然产物清除自由基抗氧化方面入手，采用体外实验和活体实验模型相结合，结合生理生化指标测定，筛选老鹰茶实现抗氧化功能的有效作用靶位和作用成分，探讨老鹰茶实现清热解毒的抗氧化物质基础。主要的研究结果如下:
　　1)通过测定老鹰茶清除DPPH自由基、铁还原力、OH-·清除率等抗氧化指标，比较宣城、湄潭、道真、雅安四种产地老鹰茶的三种溶剂提取物体外抗氧化活性及其与黄酮、酚类物质含量的关系，结果表明黄酮、酚类物质与体外抗氧化活性具有较高的正相关，其中道真、雅安产地的老鹰茶的醇提物中含有较高的黄酮总酚含量，具有较高的体外抗氧化能力。HPLC结合LC/MS分析结果表明四种产地老鹰茶提取物含有的主要活性成分都有儿茶素、金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷、槲皮素，差异主要体现在含量上。其中道真、雅安产地老鹰茶中含有较高的儿茶素、紫云英苷。
　　2)以雅安产地老鹰茶为研究对象，70％的醇粗提后，再依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分步萃取。采用大孔树脂分离技术，对具有较高体外抗氧化活性的乙酸乙酯相与正丁醇相物质进行进一步的分离纯化，并采用上述方法评价各组分抗氧化活性，结果表明，乙酸乙酯相的10％醇洗脱物(E1)具有最高的抗氧化活性。HPLC检测表明E1中的主要物质是儿茶素，含量为70.10％。对主要的活性成分的体外抗氧化分析表明，儿茶素抗氧化活性最强。
　　3)采用CCL4急性肝损伤动物模型，研究雅安产地老鹰茶不同极性提取物的保肝护肝作用，研究结果表明与模型组相比，老鹰茶各极性提取物组小鼠体内的SOD、GSH活力都有一定程度的提高，MDA含量都有所降低，除儿茶素标准品外，其中乙酸乙酯相萃取物抗氧化效果最好。
　　4)采用D-半乳糖衰老模型，研究雅安产地老鹰茶不同极性提取物延缓小鼠衰老的作用，综合考察了小鼠肝、心、脑、肾、肺器官中SOD、GSH、MDA水平的变化，实验结果表明，老鹰茶提取物对D-半乳糖诱导的小鼠衰老有一定的延缓作用，除儿茶素标准品组外，其中EEF样品组的效果最为明显，可能是儿茶素发挥了主要的抗氧化作用。
　　综上所述，老鹰茶提取物具有较好的体外抗氧化与体内抗氧化能力，其中乙酸乙酯相萃取物具有最强的抗氧化能力，相关性分析与HPLC检测结果表明，儿茶素可能是发挥体外与体内抗氧化作用的主要物质。

目录

声明

摘要

第一章 前言

1．老鹰茶简介

1．1 老鹰茶主要分布地区

1．2 老鹰茶的主要化学成分

1．3 生物活性

1．4 小结

第二章 不同产地老鹰茶抗氧化活性评价

引言

1．实验材料与方法

1．1 供试材料

1．2 实验试剂

1．3 实验设备

1．4 实验方法

2 结果与分析

2．1 活性成分含量测定

2．2 抗氧化活性分析

2．3 Pearson相关性分析

2．4 HPLC／LC-MS

3．讨论

第三章 老鹰茶不同极性提取物的体外抗氧化性评价

引言

1．材料与方法

1．1 材料

1．2 仪器与试剂

1．3 样品制备

1．4 体外抗氧化活性评价

1．5 化学成分分析

1．6 老鹰茶组分的HPLC分析

1．8 统计学分析

2．结果与分析

2．1 不同组分中黄酮、总酚含量

2．2 老鹰茶的不同溶剂提取物抗氧化活性

2．3 有效萃取物分离组分的抗氧化

2．4 HPLC／LC-MS检测酚类物质

3．讨论与结论

第四章 老鹰茶提取物拮抗四氯化碳诱导肝损伤研究

引言

1．材料与方法

1．1 试验动物

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器

1．4 方法

2 结果与分析

2．1 小鼠血清中转氨酶变化

2．2 小鼠肝匀浆中各项生化指标变化

2．3 老鹰茶提取物对小鼠肝组织病理学损失保护

3 讨论

4 本章小结

第五章 老鹰茶对D半乳糖诱导衰老小鼠保护作用

引言

1 材料与试剂

1．1 试验动物

1．2 仪器与试剂

2 材料与方法

2．1 老鹰茶提取物的制备

2．2 实验动物分组与D-半乳糖模型建立

2．3 小鼠脏器指数记录

2．4 匀浆样制备

2．5 脏器组织中蛋白含量的测定

2．6 脏器组织中丙二醛含量测定

2．7 脏器组织中超氧化物歧化酶测定

2．8 脏器组织中谷胱甘肽测定

2．9 统计学分析

3 结果与分析

3．1 小鼠脏器指数

4 讨论

5 本章小结

参考文献

致谢