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摘要
缩略词表
第一章前言
1．1引言
1．2青枯菌的致病机理
1．2．1青枯菌的分类
1．2．2青枯菌的寄主范围与生存周期
1．2．3青枯菌的致病系统
1．3青枯菌抗病研究
1．3．1模式植物拟南芥青枯病抗性研究进展
1．3．2马铃薯青枯病抗性研究概况
1．4青枯菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白毒力功能研究进展
1．4．1青枯病毒力效应蛋白的筛选
1．4．2青枯菌效应蛋白干扰植物PTI
1．4．3青枯菌效应蛋白干扰蛋白泛素化
1．4．4青枯菌效应蛋白与细胞死亡
1．4．5青枯菌效应蛋白RipAY的研究进展
1．5细菌半胱氨酸蛋白类效应蛋白的研究进展
1．5．1动物病原半胱氨酸蛋白酶效应蛋白
1．5．2植物病原半胱氨酸蛋白酶效应蛋白
1．6植物细胞的程序性死亡
1．6．1蛋白酶参与的细胞死亡过程
1．6．2自噬参与的细胞死亡过程
1．7本研究意义内容与技术路线
1．7．1研究意义
1．7．2研究内容
1．7．3研究技术路线
2．1本实验所用材料
2．1．1植物材料
2．1．2工程菌株
2．1．3实验质粒
2．1．4本实验所用的青枯菌
2．2生物信息学分析数据库
2．3分子克隆相关
2．3．1分子克隆所用试剂
2．3．2基因克隆及检测
2．3．3点突变的构建
2．4青枯菌突变体构建
2．4．1突变体片段构建
2．4．2青枯菌转化
2．4．3超量表达Rip25青枯菌构建
2．4．4青枯菌运动性测定
2．5马铃薯青枯病抗性鉴定
2．5．1马铃薯植株接种鉴定
2．5．2马铃薯薯块接种实验
2．6酵母菌的转化及诱导表达
2．7酵母生长抑制筛选
2．7烟草瞬时表达相关
2．7．1农杆菌转化
2．7．2烟草细胞瞬时表达
2．7．3细胞死亡统计
2．8蛋白免疫印迹
2．9免疫沉淀质谱鉴定
2．10共聚焦显微镜观察亚细胞结构
2．11．2 TRV介导的基因沉默
2．11．3 RNA提取与反转录
2．11．4 RT-PCR
第三章结果与分析
3．1 1．演化型IIB青枯菌核心效应蛋白的筛选
3．1．1三型分泌系统对马铃薯青枯菌致病的作用
3．1．2青枯菌UW551效应蛋白家族的核心生物信息分析
3．1．3核心效应蛋白突变体的构建与毒力筛选
3．1．4核心效应蛋白的酵母生长抑制筛选
3．1．5效应蛋白烟草瞬时表达表型与亚细胞定位
3．1．6核心效应蛋白筛选结果汇总
3．2 2．Rip25生化功能的研究
3．2．1 Rip25效应蛋白是一个促进马铃薯致病的毒力蛋白
3．2．2 Rip25在烟草中能形成细胞死亡并能够抑制酵母生长
3．2．3 Rip25具有半胱氨酸蛋白酶结构和锚定蛋白重复结构域
3．2．4 N端酶活中心与C端锚蛋白重复区的对毒力表型具有重要作用
3．2．5 Rip25蛋白在烟草和酵母表达下N端具有自切割活性
3．2．6．Rip25的锚定蛋白重复序列参与了蛋白切割位点特异性识别
3．3 3．Rip25介导细胞死亡的研究
3．3．1沉默免疫相关基因无法干扰Rip25介导的细胞死亡
3．3．2 Rip25在烟草细胞产生的细胞死亡过程伴随自噬发生
3．3．3沉默细胞自噬相关基因不能干扰Rip25的细胞死亡
第四章讨论
4．1酵母细胞中StHMO1回补Rip25介导酵母抑制生长
4．2 Rip25具有低温酶活适应性
4．3 Rip6与Rip25的毒力机制的异同
4．3三种效应蛋白筛选方法具有不同的优势
4．4未知功能的细菌效应蛋白研究策略
4．5 Rip25蛋白酶自切割的作用
4．6锚定蛋白重复序列的功能
4．7 Rip25介导细胞死亡机制
参考文献
附录
致谢
