声明
摘要
缩略词表
1研究背景
2蕨类植物配子体到孢子体过程
2．1植物世代交替现象
2．2蕨类植物配子体形成孢子体的途径
2．3配子体到孢子体生殖过程的基因调控
2．4蕨类植物性器官分化研究进展
3无配子生殖研究进展
3．1无配子生殖的离体诱导培养
3．2无配子生殖发生的机理
4体细胞获得胚胎发生能力的机理
5转录组测序技术在挖掘植物不同性状间及发育过程中关键基因的应用
6荷叶铁线蕨研究进展
7本研究的目的和意义
第二章荷叶铁线蕨配子体有性生殖和无配子生殖的离体培养
1前言
2材料与方法
2．1试验材料
2．2孢子萌发
2．3有性生殖
2．4无配子生殖
2．5孢子萌发和配子体培养条件
2．6扫描电镜观察
3结果与分析
3．1孢子萌发
3．2有性生殖
3．3无配子生殖
3．4能进行无配子生殖的配子体的形态特征
3．5无性芽点的特征
4讨论
4．1赤霉素对性器官分化的作用
4．2水对受精现象发生以及孢子体产生的作用
4．3外源糖诱导无配子生殖的作用
4．4配子体通过无配子生殖高效产生孢子体的现象
第三章有性生殖和无配子生殖孢子体的形态观察及倍性鉴定
1前言
2材料与方法
2．1孢子体移栽及形态观察
2．2扫描电镜观察孢子体叶片
2．3利用流式细胞仪鉴定孢子体倍性
2．4利用SSR分子标记鉴定孢子体倍性
3结果与分析
3．1不同生殖方式产生的孢子体的形态观察
3．2不同生殖方式孢子体叶片表面扫描电镜观察
3．3流式细胞仪倍性鉴定结果
3．4 SSR分子标记鉴定结果
4讨论
4．1不同生殖方式产生的孢子体的特征
4．2蕨类植物世代周期中倍性变化特征
4．3蕨类植物孢子体的倍性鉴定方法
第四章配子体进行无配子生殖不同发育时期的转录组及表达谱研究
1前言
2材料与方法
2．1配子体培养和取样
2．2 RNA提取
2．3 RNA-seq的实验步骤
2．4转录组数据分析
2．5数字基因表达谱(DGE)
2．6基因差异表达分析
2．7荧光实时定量PCR分析
3结果与分析
3．1 RNA提取
3．2转录组数据库的组装
3．3 Unigene的功能注释
3．4数字基因表达谱文库构建
3．5基因差异表达分析
3．6配子体无配子生殖过程中的差异事件分析
3．7无配子生殖过程中重要转录因子的鉴定
3．8候选基因在无配子生殖不同发育时期的表达水平研究
4讨论
4．1细胞壁代谢途径在无配子生殖中的调控作用
4．2激素代谢途径在无配子生殖中的调控作用
4．3体细胞胚胎发生受体激酶基因在无配子生殖中的调控作用
4．4转录因子在无配子生殖过程中的调控作用
4．5与无配子生殖启动有关的基因
第五章荷叶铁线蕨配子体基因表达水平分析中内参基因的筛选
1前言
2材料与方法
2．1试验材料
2．2外源物质处理
2．3不同生殖方式的发育时期
2．4总RNA提取和cDNA合成
2．5候选内参基因的选择和引物设计
2．6目的基因片段的PCR扩增
2．7 qRT-PCR分析
2．8基因表达稳定性分析
3结果与分析
3．1引物的特异性分析
3．2候选内参基因的Ct值分析
3．3 geNorm分析结果
3．4 NormFinder分析结果
3．5 BestKeeper分析结果
4讨论
4．1筛选不同试验条件下合适内参基因的必要性
4．2各试验条件下合适的内参基因
第六章荷叶铁线蕨配子体有性生殖和无配子生殖方式的比较转录组学研究
1前言
2材料与方法
2．1材料
2．2 RNA提取
2．3文库构建及测序
2．4测序数据处理
2．5基因注释
2．6基因差异表达分析
2．7荧光实时定量PCR分析
3结果与分析
3．1两种生殖方式配子体的形态发育特征
3．2配子体转录组的测序及拼接
3．3 unigene的切能注释
3．4差异表达基因分析
3．5利用qRT-PCR方法验证转录组测序结果的准确性
3．6与不同生殖方式启动有关的代谢途径分析
3．7与淀粉与蔗糖代谢途径有关的基因在配子体不同发育时期的表达分析
3．8植物激素信号转导途径有关的基因在配子体不同发育时期的表达分析
4讨论
4．1配子体有性生殖和无配子生殖的总体基因表达模式
4．2细胞壁合成有关的基因在无配子生殖启动阶段的网络调控模式
4．3激素相关的基因在无配子生殖启动阶段的调控模式
第七章与荷叶铁线蕨性器官及无性胚细胞分化有关的基因分析
1前言
2材料与方法
3结果与分析
3．1配子体性器官分化与无性胚细胞分化时期比较分析
3．2转录因子在性器官以及无性胚细胞分化中的作用
3．3 DNA甲基化有关的基因在性器官以及无性胚细胞分化中的作用
3．4候选基因的基因表达分析
4讨论
4．1转录因子在蕨类植物性器官及无性胚细胞分化中的作用
4．2 DNA甲基化在性器官分化以及无性胚细胞分化中的作用
全文小结
参考文献
附录
致谢
华中农业大学;
