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摘要
缩略语表(Abbreviation)
第1章文献综述
1．2 DEAD-box RNA解旋酶
1．2．1 DEAD-box RNA解旋酶家族的结构和功能
1．2．2 DEAD-box RNA解旋酶与病毒的关系
1．2．3 DEAD-box RNA解旋酶与天然免疫的关系
第2章研究目的和意义
第3章材料与方法
3．1实验材料
3．1．1细胞、毒株与菌株
3．1．2载体与质粒
3．1．3工具酶及主要化学试剂
3．1．4 Western Blot实验材料
3．1．5培养基及其配制
3．1．6主要缓冲液与相关试剂及其配制
3．1．7主要实验仪器及设备
3．1．8分子生物学及序列分析软件
3．2实验方法
3．2．1细胞总RNA的提取
3．2．2 cDNA的合成以及目的片段扩增
3．2．3限制性内切酶酶切反应
3．2．4 PCR产物或酶切产物的电泳检测
3．2．5 PCR产物或酶切产物的回收与纯化
3．2．6外源DNA片段与质粒载体的连接反应
3．2．7大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法)
3．2．8连接产物的转化
3．2．9重组质粒的制备与鉴定
3．2．10真核表达质粒构建
3．2．11质粒的转染(脂质体介导的瞬时转染法)
3．2．12双荧光素酶报告基因检测
3．2．13荧光定量PCR
3．2．14 Western Blot与Co-IP
3．2．1 5细胞核和细胞质蛋白抽提
3．2．16银染检测分析
3．2．17染色质免疫共沉淀
3．2．18 siRNA干扰实验
3．2．19基因敲除细胞系的构建
3．2．20统计学方法
第4章结果与分析
4．1细胞核内IRF3的互作组学研究
4．2 DDX18与IRF3互作的验证
4．3 DDX18负调控IFN-β的产生
4．3．3敲除DDX18上调IFN-β启动子激活
4．4 DDX18负调控IFN-β并不依赖于其解旋酶及ATP酶活性
4．4．2 DDX18酶活突变体的结构预测
4．4．3 DDX18酶活突变体负调控IFN-β启动子激活
4．5 DDX18负调控IFN-β产生的机制
4．5．2 DDX18阻碍IRF3与IFN-β启动子结合
第5章讨论与结论
5．1讨论
5．1．2 DDX18负调控IFN-β的研究
5．1．3 DDX18负调控IFN-β不依赖于其解旋酶和ATP酶活性
5．1．5 DDX18负调控IFN-β的生物学意义
5．2结论
参考文献
致谢
