肠外致病性大肠杆菌氧化应激相关基因的挖掘及研究

目录

论文说明

声明

摘要

缩略词表(Abbreviation)

文献综述

1大肠杆菌概述

1．1致病性大肠杆菌

1．2大肠杆菌中的氧化应激

1．3大肠杆菌中的氧化应激调控

1．4转座子插入突变体的概述

1．5大肠杆菌脂多糖的概述

1．6大肠杆菌O-糖基化的概述

2．肠外致病性大肠杆菌对抗过氧环境基因的筛选

2．1目的与意义

2．2实验材料

2．2．1细菌，细胞与质粒

2．2．2酶和相关试剂

2．2．3培养基和试剂的配置

2．2．4仪器和设备

2．2．5 PCR引物

2．3实验方法

2．3．1突变体库的构建和质量检测

2．3．2筛选对H2O2敏感的大肠杆菌RS218突变体

2．3．3 TA1L-PCR扩增Tn5侧翼序列

2．3．4突变位点定位

2．3．5 λRed敲除构建缺失株

2．3．6生化鉴定

2．3．7细菌间竞争能力分析

2．3．8黏附侵入能力试验

2．3．9小鼠组织载茵量试验

2．3．10生物被膜形成能力的检测

2．3．11统计分析

2．4结果和分析

2．4．1构建突变体库和突变株的鉴定

2．4．2筛选在过氧条件下生长缓慢的突变株

2．4．3初步确定后续突变株

2．4．4构建缺失株△168、△192、△N-2和△3-45

2．4．5缺失株△168、△192、△N-2和△3-45与野生株黏附侵入HBMEC能力和小鼠组织定殖能力比较

2．5讨论

3．对O抗原聚合酶(pcw)的抗氧化性及致病性的探究

3．1目的与意义

3．2实验材料

3．2．1细菌，细胞与质粒

3．2．2酶和相关试剂

3．2．3培养基和试剂的配置

3．2．4 PCR引物

3．3实验方法

3．3．1生物信息学分析

3．3．2回补菌株的构建

3．3．3细胞内ROS测定

3．3．4细菌生长曲线测定

3．3．5黏附侵入实验

3．3．6抗吞噬能力和吞噬后存活能力试验

3．3．7血清杀菌试验

3．3．8小鼠实验

3．3．9 LPS电泳样品的制备及电泳

3．3．10 Western blot鉴定

3．3．11统计分析

3．4结果与分析

3．4．1蛋白序列分析

3．4．2构建回补株C-pcw

3．4．3细菌对氧化应激的抗性需要pcw基因

3．4．4 pcw影响细菌对吞噬作用的耐受和细胞内生存

3．4．5pcw基因的缺失改变了LPS的结构

3．4．6pcw促进细胞黏附和侵袭，对补体介导的杀伤具有抗性

3．4．7pcw基因的缺失影响小鼠模型中大肠杆菌的致病性

3．5讨论

4结论

参考文献

致谢