声明
摘要
缩略词表(Abbreviation)
1前言
1．1大肠杆菌
1．1．1大肠杆菌的分类
1．1．2 ExPEC脑膜炎
1．2血脑屏障
1．2．1脑微血管内皮细胞
1．2．2星形胶质细胞
1．3外泌体
1．3．1外泌体的生成与运输
1．3．2外泌体的成分
1．4 miRNA
1．4．1 miRNA的作用
1．4．2 miRNA与外泌体
1．5本研究的目的和意义
2材料及方法
2．1试验材料
2．1．1菌株
2．1．2细胞系
2．1．3药品试剂
2．1．4仪器设备
2．1．5各种试剂配制方法
2．1．6引物
2．2试验方法
2．2．1 BMECs和U251的传代培养
2．2．2 BMECs的饥饿处理
2．2．3细菌刺激细胞和收集样品
2．2．4外泌体的提取
2．2．5外泌体的提纯
2．2．6外泌体的提纯后洗脱液的置换
2．2．7外泌体透射电镜观察
2．2．8外泌体粒径分析
2．2．9细胞RNA提取和浓度测定
2．2．10外泌体RNA提取和浓度测定
2．2．11 BCA法测定外泌体／细胞蛋白浓度
2．2．12外泌体／细胞总蛋白样品的制备
2．2．13 SDS-PAGE凝胶电泳
2．2．14 Western Blotting
2．2．15荧光定量qPCR
2．2．16外泌体摄取实验
2．2．17 ECIS测定外泌体对BMECs细胞屏障功能的影响
2．2．18外泌体miRNA建库和测序分析
2．2．19外泌体miRNA KEGG富集分析
2．2．20统计分析
3结果与分析
3．1外泌体的分离和鉴定
3．2外泌体作用于BMECs
3．2．1外泌体能被BMECs细胞摄取
3．2．2 PCN033感染BMECs细胞分泌的外泌体能破坏BMECs的屏障功能
3．2．3 PCN033感染的BMECs分泌的外泌体促进BMECs活化
3．3外泌体作用于星形胶质细胞U251
3．3．1外泌体能被U251摄取
3．3．2 PCN033感染BMECs细胞分泌的外泌体抑制U251活化
3．4外泌体miRNA测序分析
3．4．1 mLRNA维恩图分析
3．4．2 miRNA差异表达分析
3．4．3 miRNA聚类分析
3．4．4差异表达miRNA靶基因KEGG分析
3．5外泌体miRNA测序结果验证和分析
3．5．1外泌体miRNA测序结果验证
3．5．2外泌体差异表达miRNA的靶基因预测与KEGG分析
4讨论
4．2 ExPEC感染BMECs细胞分泌的外泌体抑制U251表达GFAP
4．3 ExPEC感染BMECs细胞分泌的外泌体中差异表达miRNA的分析
5结论
参考文献
致谢
