声明
摘要
主要缩略语表(Abbreviations)
1文献综述
1．1研究问题的由来
1．2运输应激与肠道氧化损伤
1．2．1运输应激简介
1．2．2运输应激与肠道氧化损伤
1．3氧化应激对肠道细胞结构及功能的影响
1．3．1 NOX1与氧化应激
1．3．2氧化应激对肠道细胞结构及功能损伤的影响
1．4氧化应激与细胞自噬的关系
1．4．1细胞自噬概述
1．4．2氧化应激对细胞自噬的影响
1．6转录组测序(RNA-Seq)技术简介
1．7研究的目的与意义
2实验材料
2．1生猪运输与屠宰
2．2细胞
2．3引物及核苷酸序列
2．4主要试剂
2．5主要设备
2．6主要软件、数据库
3实验方法
3．1样品收集
3．2细胞培养
3．3空肠组织HE染色
3．4 SOD、MDA、LPS、LDH检测
3．4．1猪血清SOD、MDA、LPS检测
3．4．2细胞SOD、MDA、LDH检测
3．5总RNA的提取和反转录
3．5．1组织总RNA的提取
3．5．2细胞总RNA的提取
3．5．3 RNA反转录
3．6荧光定量PCR(QPCR)
3．7总蛋白的提取
3．7．1组织总蛋白的提取
3．7．2细胞总蛋白的提取
3．8 BCA法检测组织蛋白浓度
3．9蛋白免疫印迹(Western Blot)
3．9．1 SDS-PAGE胶的配置
3．9．2转膜
3．9．3杂交
3．9．4显影
3．11细胞ROS水平及线粒体膜电位、线粒体数量检测
3．11．1细胞ROS水平检测
3．11．2细胞线粒体膜电位检测
3．11．3细胞线粒体数量检测
3．12数据统计
4实验结果与分析
4．1运输应激对生猪空肠形态结构的影响
4．2运输应激对血清生化指标的影响
4．3运输应激对生猪空肠组织HO-1和NOX1 mRNA表达的影响
4．4运输应激对生猪空肠组织紧密连接蛋白表达的影响
4．5运输应激诱导生猪空肠组织自噬产生
4．6运输应激激活猪空肠组织线粒体自噬水平
4．7 RNA-Seq数据分析和差异表达基因(DEGs)的鉴定
4．7．1 RNA-Seq差异表达基因筛选
4．7．2差异表达基因的GO功能注释分析
4．7．3差异表达基因的KEGG通路分析
4．7．4差异表达基因QPCR验证
4．7．5差异表达基因蛋白互作分析
4．7．6生猪运输应激肠道损伤相关差异表达基因分析
4．8 NOX1抑制剂对猪肠上皮细胞损伤的调节作用
4．8．2 NOX1抑制剂对猪肠上皮细胞MDA、SOD、LDH的影响
4．8．3 NOX1抑制剂对猪肠上皮细胞ROS产生及线粒体损伤的调节
4．9 NOX1抑制剂对猪肠上皮细胞自噬的调节
4．10 NOX1抑制剂对猪肠上皮细胞SIRT1／PGC-1α通路的调节
4．11 NOX1抑制剂对猪肠上皮细胞黏膜屏障的调节
5讨论
5．1运输应激对肠道抗氧化功能的影响
5．2运输应激对肠道黏膜屏障损伤的影响
5．3运输应激激活肠上皮细胞细胞自噬和线粒体自噬水平
5．5 NOX1抑制剂调节肠上皮细胞氧化损伤
6结论
参考文献
附录
致谢
