声明
摘要
缩略词(Abbreviation)
1序言
1．1藻胆体
1．2藻胆蛋白
1．2．1别藻蓝蛋白
1．2．2藻蓝蛋白、藻红蛋白和藻红蓝蛋白
1．3藻胆色素
1．4连接蛋白
1．5光敏色素
1．6橙色类胡萝卜素蛋白OCP
1．7光保护机制
1．8课题设计及研究意义
2植物光敏色素PΦB的有效制备方法
2．1引言
2．2实验材料与试剂
2．3实验仪器
2．4实验方法
2．4．1藻总DNA提取
2．4．2质粒构建
2．4．3 ApcE2色素化蛋白在E．coli内的表达
2．4．4蛋白的破碎与纯化
2．4．5细胞荧光活性比较
2．4．6 SDS-PAGE电泳
2．4．7紫外可见光谱及荧光光谱测定
2．4．8摩尔消光系数和荧光量子产率的测定
2．4．9可逆光转换测定
2．4．10不同方法及片段色素的萃取方法及产量的比较
2．4．11 HPLC纯化与质谱鉴定
2．4．12质谱检测的条件
2．4．13脱辅基蛋白与萃取色素的体外重组
2．4．14蛋白间的色素转移
2．5实验结果与分析
2．5．2 PCC7335 ApcE2蛋白与色素PΦB的连接方式
2．5．3蛋白在E．coli体内的色素化结果
2．5．4不同PΦB-ApcE2蛋白色素产量比较
2．5．5色素萃取方法结果比较
2．5．6萃取色素的性质鉴定
2．5．7游离色素PΦB与脱辅基蛋白的体外重组及光转化
2．5．8 PΦB色素的体外转移
2．5．9体内重组与体外色素转移的对比
2．6本章小结
3光敏水溶性橙色类胡萝卜素蛋白OCP结晶
3．1前言
3．2实验材料与试剂
3．3实验仪器
3．4实验方法
3．4．1 ocp-His质粒的构建
3．4．2突变藻的构建、筛选及培养
3．4．3镍离子亲和层析法纯化OCP-His蛋白
3．4．4阴离子交换柱进一步纯化OCP-His蛋白
3．4．5目的蛋白OCP的结晶与筛选
3．4．6 OCP-His晶体衍射
3．5结果与分析
3．5．2 OCP-His突变藻的筛选结果
3．5．3 OCP-His蛋白的纯化结果
3．5．5 OCP-His蛋白的结晶
3．6本章小结
4 OCP蛋白淬灭荧光的作用机制
4．1引言
4．2实验材料与试剂
4．3实验仪器
4．4实验方法
4．4．1载体的构建与克隆
4．4．2蛋白的色素化与表达
4．4．3蛋白的纯化
4．4．4 OCP的光转化实验
4．4．5藻胆体的制备及SDS-PAGE检测
4．4．6 OCP(W288A)与目的蛋白的NPQ
4．4．7 OCPR与藻胆体及部分藻胆蛋白的NPQ
4．4．8荧光寿命测定
4．4．9 Stern-Volmer曲线测定
4．4．10 pull down实验
4．4．11 OCPR暗回复实验
4．4．12荧光淬灭时间曲线的测定
4．5实验结果与分析
4．5．1质粒的构建结果
4．5．2蛋白色素化重组结果
4．5．3 OCP的光转化实验结果
4．5．4藻胆体的制备及光谱、SDS-PAGE检测
4．5．5 OCP(W288A)与目的蛋白荧光淬灭结果分析
4．5．6 OCPR与藻胆体及部分藻胆蛋白的荧光淬灭结果分析
4．5．7荧光寿命测定结果
4．5．8藻胆体、藻胆蛋白及其他蛋白Stern-Volmer曲线测定
4．5．9 pull down实验结果
4．5．10 OCPR暗回复实验
4．5．11荧光淬灭时间曲线的测定结果分析
4．6本章小结
参考文献
附录
致谢
