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质谱法研究UBIAD1蛋白介导对H-Ras蛋白的香叶基香叶基修饰

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目录

声明

1 绪论

1.1 UBIAD1研究现状

1.2 UBIAD1蛋白与维生素K2

1.3 UBIAD1蛋白与CoQ10生物合成

1.4 UBIAD1蛋白与SCCD疾病

1.5 UBIAD1蛋白与脂代谢和肿瘤

1.6 Ras研究背景

1.7 UBIAD1蛋白与Ras-MAPK信号通路

1.8 蛋白质组学介绍

2 研究目的和意义

3 实验材料和方法

3.1 实验仪器

3.2 实验材料

3.3 缓冲液和培养基

3.4 实验方法

4 实验结果

4.1 大肠杆菌E. Coli中H-Ras检测及它的CVLS肽段检测

4.2 真核细胞H-Ras检测及它186位点法尼基化即fmC修饰检测

4.3 真核细胞UBIAD1检测及其对H-Ras186位点法尼基修饰影响

4.4 真核细胞H-Ras186位点上香叶基香叶基修饰即ggmC检测

4.5 HEK293和T24中UBIAD1对H-Ras186位点两种修饰的影响

5 讨论

6 总结与展望

致谢

参考文献

附录 英文缩写词表

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摘要

UBIAD1(UbiA prenyltransferase domain containing1)也称为TERE1(transitional epithelial response gene),由McGarvey等人于2001年首先发现。UBIAD1蛋白在生理学和病理学上起着非常重要的作用,包括维生素K2和CoQ10的生物合成,也包括由脂质异常代谢引起的SCCD疾病,帕金森病和膀胱癌。研究发现UBIAD1蛋白可以通过H-Ras-MAPK信号通路抑制膀胱癌细胞的生长。人体中Ras蛋白主要有四种形式,分别为H-Ras,N-Ras,Ki4A-Ras和 Ki4B-Ras。其中N-Ras和K-Ras的186位点半胱氨酸既可以发生法尼基化修饰也可以发生香叶基香叶基化修饰,而H-Ras的186位点的半胱氨酸目前只发现可以发生法尼基化修饰。
  本研究通过运用液相联用质谱技术LC-MS/MS在人体的胚肾细胞HEK293细胞和膀胱癌细胞T24细胞中发现了UBIAD1蛋白会催化H-Ras蛋白在186位点会产生香叶基香叶基修饰,并且发现了在HEK293和T24细胞中,在UBIAD1蛋白存在的情况下,法尼基化修饰的H-Ras蛋白可能会转化为香叶基香叶基修饰的H-Ras蛋白,研究结果为我们更加深入的了解UBIAD1蛋白和H-Ras蛋白在人类疾病中的作用奠定了基础。

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