Dicer入核通过介导HP1α促进SFRP1启动子甲基化诱导胆管癌发生发展的机制研究

摘要

目的：研究Dicer、Hp1α在胆管癌发生发展过程中的分子机制及作用，为胆管癌的分子靶向治疗提供新的途径。 方法：利用定量PCR,免疫组织化学染色和WB检测了Dicer在胆管癌细胞和正常胆管上皮细胞中胞核和胞浆中的表达和定位情况。利用慢病毒转染胆管癌细胞构建Dicer上调，下调稳定表达的胆管癌细胞株。通过细胞侵袭、迁移和增殖实验检测胆管癌细胞生物学效应。实验采用基因组甲基化测序，染色质免疫共沉淀和免疫共沉淀等实验深入探讨Dicer介导HP1α在胆管癌生物学行为的分子机制。 结果：研究结果表明Dicer在胆管癌组织细胞核中中呈高表达状态(stain index：癌旁正常组织=1.66±0.36;胆管癌组织7.12±0.84)，在胆管癌细胞中Dicer转运进入细胞核，介导HP1α/H3K9me3/SUV39H1/Dnmts复合物形成。在胆管癌细胞中Dicer可以促进H3K9三甲基化，并且进一步影响基因组的甲基化表型。通过Western blot和定量PCR探究得到下调Dicer可以通过去甲基化作用恢复SFRP1的表达，为了证实Dicer和SFRP1表达的相关性，我们在40例胆管癌和13例癌旁正常组织的标本中检测Dicer和SFRP1的mRNA表达水平。 结果显示Dicer和SFRP1的表达呈负相关关系，Pearson指数为-0.61(P＜0.01)。与对照组相比，Dicer下调后能抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭能力，但其迁移能力没有明显的变化。而且，这种被抑制的侵袭和增殖能力，在SFRP1基因限制表达的情况下，可以被部分恢复。 结论：在胆管癌发生发展过程中，Dicer移位进入细胞核并与HP1α形成特异性偶联，通过染色质修饰调控SFRP1基因启动子甲基化，从而降低SFRP1基因的表达，最终促进胆管癌细胞的增殖和侵袭。

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