鸭跖草提取物抗病毒作用的研究

摘要

目的：
　　 采用了渗漉技术和离子交换技术，对鸭跖草中生物碱进行提取。用鸭跖草提取物做体内及体外的抗病毒实验，并且通过与空白对照及阳性药药效比较，评价鸭跖草提取物抗病毒的作用。进一步证明开发鸭跖草抗病毒作用的价值。
　　 方法：
　　 1、流感病毒A型H2N3株致小白鼠半数死亡(LD50)测定：
　　 将培养到得的流感病毒A型H2N3病毒进行10倍连续的稀释即浓度从10-1～10-8，每个浓度接种4只小白鼠，接种方式为鼻吸和腹腔注射，给药后观察2周，保持实验室内通风，食物照常供给。根据小白鼠发病以及死亡情况，计算出半数致死量(LD50)值。
　　 2、小白鼠体内抑病毒试验：
　　 实验共设有6组，每组小白鼠10只，设置鸭跖草提取物3个剂量组，即大剂量组、中剂量组和小剂量组。其他的组为病毒唑治疗组，病毒感染组和正常对照组。给药前实验器材常规消毒，室内保持通风，维持温度20℃左右，维持相对湿度60％。鸭跖草提取物给药组腹腔注射，病毒组剂量采用致死剂量0.4ml/只，经鼻吸入及腹腔注射种入病毒，病毒唑组腹腔注射给药，所有治疗组连续给药7天。食物照常供给。每日观察动物的反常现象，比如矗毛、呆滞、耳末稍有充血现象等，观察死亡时间和死亡数。所有动物用药后连续观察2周，然后处死，解剖取出肺组织，称量每组小白鼠的体重及肺重，计算出肺指数。将肺部组织匀浆，然后将其接种到鸡胚中，过2～4天后收集被种植鸡胚的尿囊液，按倍比稀释后同鸡红细胞悬液混合，1小时后观察红细胞凝集情况，计算出病毒血凝滴度。
　　 3、体外抗流感病毒试验：
　　 将Vero细胞放在96孔培养板上培养，然后加入100 TCID50病毒液，在，37℃的温度下通入5％CO2吸附1h，将多余的病毒液去除，加入5个浓度的鸭跖草提取物，首个浓度为1280 ug/ml，其余浓度0.25倍稀释得到。即分别为1280 ug/ml、320 ug/ml、80 ug/ml、20 ug/ml、5ug/ml，设4个组，病毒对照，细胞对照，鸭跖草提取物和阳性药物对照组。将每一组在37℃时通入5％CO2培养，然后观察细胞病变，记录病变程度，当病毒对照细胞病变达75％以上时实验停止，最后通过MTT法检测病毒抑制率。
　　 4、小鼠肺组织匀浆做ELISA试验：
　　 该试剂盒采用的是双抗体夹心法，先把小鼠的肺组织匀浆液，按试剂盒操作方法测出方法6个组的OD值。OD值的大小即代表病毒抗原的多少，反应了病毒被药物抑制的程度。
　　 结果：
　　 1(LD50)测定：小白鼠感染病毒后，经过短暂潜伏期(7天左右)，便进入发病状态。经滴定该病毒的半数致小白鼠死亡毒力(LD50)为10-5.5/0.2ml。
　　 2体外试验结果表明，鸭跖草提取物在体外具有明显的抑制流感病毒的作用，与具有抗流感病毒作用的病毒唑比较，抑制流感病毒作用无明显差异(P＞0.05)。鸭跖草提取物体内试验中各剂量组对小鼠的肺指数均显著低于病毒模型组，P＜0.01；存活率和平均存活时间，各组动物间显示出明显差异，与已知具有治疗效果的病毒唑比，P＞0.05。正常对照动物没有死亡情况。
　　 3测得的OD(样本的光密度)值与病毒组OD值相比无明显差异(P＞0.05)。高剂量组与低剂量组有明显差异P＜0.01
　　 结论：
　　 鸭跖草提取物体外实验中有明显抑制流感病毒的作用，它与阳性药病毒唑作用比无明显差异(P＞0.05)，可以判断鸭跖草提取物体对流感病毒具有一定疗效的预防和治疗作用，与病毒唑相当，可以作为一种抗流感病毒的中草药。体内实验中肺指数，存活天数，肺组织匀浆流感病毒含量，说明鸭跖草提取物能抑制甚至杀灭流感病毒，从而减弱流感病毒对肺部组织的感染，改善流感导致的肺病变，具有抗流感病毒的作用。

目录

文摘

英文文摘

前言

论文说明:缩略词表

声明

第一部分 鸭跖草总碱的提取

第二部分 鸭跖草提取物体外抗病毒作用研究

第三部分 鸭跖草提取物体内抗病毒作用研究

讨论

结语

参考文献

附录 实验观察指标及统计方法

文献综述 中医药抗流感病毒的研究进展

致谢