小柴胡汤及其拆方抗流感病毒作用的体外实验研究

摘要

目的:
　　 小柴胡汤出自《伤寒论》，由柴胡、黄芩、半夏、生姜、人参、炙甘草、大枣七味药组成，全方药虽七味，但配伍得当，组方严谨，具有寒热并用，攻补兼施，升降协调，和解少阳，疏利三焦，调达气机，宣通内外，运转枢机的作用。现代临床常用于呼吸系统疾病和传染病，如：上呼吸道感染、流行性感冒、不明原因发热、流行性腮腺炎、流行性结膜炎等。流行性感冒是由流感病毒所引起的急性呼吸道传染病，可造成世界性大流行。近年来由于流感病毒的肆虐，迫切需要新型的抗流感新药，而流感病毒的抗原又不断变异，使得西药难以发挥理想的作用。本课题的创新之处在于，将传统中医药理论与现代科学技术方法相结合，在前期体内实验的基础上，借助血清药理学和细胞培养技术，进一步通过体外实验，研究小柴胡汤及其配伍组对流感病毒的抑制作用，研究小柴胡汤及其拆方抗流感病毒的作用机制，以及各配伍组之间的药理协同作用机理。本实验研究对于揭示经方配伍治疗的科学性和严谨性，弘扬祖国传统中医药学，发掘祖国传统中医药学宝库，为临床用方提供有力的理论依据，都具有重要的意义。
　　 方法:
　　 本实验应用血清药理学和细胞培养技术，研究小柴胡汤及各配伍组的细胞毒性和抑制流感病毒的作用。观察小柴胡汤全方组及其各配伍组对流感病毒肺适应株的抑制作用。具体方法如下：
　　 1、将Wistar大鼠16只，随机分为8组，分别灌服相应组别药物，制备含药血清以备后期实验用。
　　 2、猪肾细胞常规保存、传代，测定流感病毒滴度，得到病毒的TCID50，以备后期实验时使用。
　　 3、含药血清对细胞的毒性测试：将8组含药血清分别加入单层细胞悬液中3天后MTT法，570nm波长比色测OD值，比较不同浓度含药血清对细胞生长的影响，以确定下一步实验中含药血清的加入量。
　　 4、体外抗病毒作用观察：将100TCID50的甲型流感病毒液接种于长成单层的猪肾细胞上，置37℃、5％CO2培养箱内吸附2小时后，小心吸去病毒液，用PBS洗涤3次，分别加入最终浓度为10％的8组含药血清，每组设四个平行孔。药物与细胞作用3天后，MTT法570nm波长比色测OD值，计算抑制百分率。
　　 结果:
　　 1、比较各组不同浓度的含药血清对猪肾细胞的毒性测定可以看出，各组药物随着含药血清浓度的增加细胞呈增殖生长。但各组除了在10％的浓度与正常对照血清组无差异外，在5％、20％、40％的浓度时均与正常对照血清组存在差异。可能是由于血清比例低时，各组含药血清中血药浓度偏低；血清比例高时，血药浓度已经饱和，而血清中的球蛋白在补体中或其它物质成分作用下，可产生细胞毒而对细胞有损害。为便于以下实验比较，确定下一步实验含药血清的浓度为10％。
　　 2、小柴胡汤全方组对流感病毒有明显抑制作用，其他各拆方组中含有柴胡、黄芩的各组对流感病毒的抑制作用明显高于不含柴胡、黄芩的各组，表明小柴胡汤可以有效抑制流感病毒，柴胡、黄芩在抗流感病毒中发挥了重要的作用。
　　 结论:
　　 应用血清药理学研究中药复方体外抗病毒实验，体外实验条件可控性强.药物效应易于检测、可深入揭示药物作用的机理；综合本实验结果，小柴胡汤具有明显的抗流感病毒作用，毒副作用小，其作用优于各拆方组；在小柴胡汤方剂中，以柴芩配伍的各组抗流感病毒的作用最强。表明在该方剂中，主要成分柴胡，黄芩在抗流感病毒感染环节中可能起着主要的作用，生姜、半夏、人参、大枣、炙甘草对流感病毒没有明显的抑制作用，但在整体抗流感病毒作用中不是完全没有作用，其机理有待在下一步实验中探讨。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略词表

声明

前言

一、实验研究

实验一 含药血清的制备

实验二 病毒滴度的测定

实验三 含药血清对细胞的毒性测试

实验四 小柴胡汤体外抗病毒作用观察

二、讨论

1.小柴胡汤的理论研究

2.中医学对流行感冒的认识

3.现代医学对流行感冒和流感病毒的认识

4.西药抗流感病毒的研究现状

5.中药抗流感病毒的研究现状

三、结论

四、参考文献

五、综述：小柴胡汤实验研究进展

六、致谢