蜈蚣多肽的提取分离及镇痛活性研究

摘要

目的：在临床使用中蜈蚣的水煮液具有祛风镇痛、攻毒散结作用，本课题旨在发现和分离蜈蚣中具有镇痛作用的多肽确定其最佳提取工艺、。
　　 方法：1.提取工艺研究用乙醇加热回流和醇提水沉的方法提取，采用三因素三水平的正交设计方法，以浸膏率和含氮量为指标，综合考虑得出蜈蚣中所含具有热稳定性的多肽类成分的最佳提取工艺路线。
　　 2.分离纯化采用海藻酸吸附、盐析等方法对粗提取物中的蛋白多肽进行富集，然后再运用葡聚糖凝胶G25、葡聚糖凝胶G50和反相高效液相等分离技术对目标活性多肽进行分离，以镇痛活性强弱作为药效学指标，分离纯化得到具有镇痛活性的蜈蚣多肽单一成分，测定其分子量大小，及其结构特征。
　　 3.活性研究通过向小鼠体内腹腔注射新鲜醋酸使其疼痛造模的醋酸扭体法，以水和阿司匹林作为阳性和阴性对照，研究及测定蜈蚣多肽的镇痛活性及活性大小。
　　 结果与讨论:本课题首次提出将蜈蚣中具有镇痛活性的蜈蚣多肽成分提取分离出来，找到蜈蚣多肽的最佳提取工艺路线，找到蜈蚣多肽的分离纯化技术，得到蜈蚣多肽的单体。对蜈蚣镇痛多肽单体进行结构分子量大小等测定，了解其作用机制。通过醋酸扭体法测定蜈蚣粗提物及蜈蚣多肽单体的镇痛活性大小。为蜈蚣镇痛制剂的研究奠定基础。本课题最终分离纯化得到一个具有镇痛活性的分子量约为13KD的偏弱酸性的蜈蚣多肽单体，为首次从蜈蚣药材中分离纯化得到一个具有镇痛活性的多肽。蜈蚣为我国传统中药，本课为中药现代化应用提供可借鉴的示范作用。蜈蚣多肽具有良好的镇痛作用，对镇痛药的研发及其市场提供理论基础及技术指导。

目录

文摘

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论文说明:英文缩略词

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前言

第一章 蜈蚣多肽的提取工艺研究

1.仪器试剂及材料

1.1仪器试剂

1.2材料

2.方法

2.1加热回流提取

2.2醇提水沉法

2.3统计方法

3.结果

3.1以浸膏率为考察指标的实验结果

3.2以含氮量为考察指标的实验结果

3.3验证实验

第二章 蜈蚣多肽的分离纯化

1.试剂与器材

1.1试剂

1.2器材

2.方法

2.1海藻酸吸附

2.2盐析

2.3凝胶过滤层析

2.4高效液相色谱法分离

3.结果

3.1海藻酸吸附

3.2盐析

3.3 sephadex G-25过滤层析

3.4 sephadex G-50过滤层析

3.5高效液相色谱法

3.6验证实验

第三章 蜈蚣多肽镇痛活性研究

1.试剂与器材

1.1试剂

1.2器材

1.3动物

2.方法

2.1配制样品

2.2具体操作

3.结果

第四章 蜈蚣提取物及多肽单体的理化性质

1仪器与试剂

1.1仪器

1.2试剂

2.方法

2.1紫外扫描

2.2质谱测定分子量

3.结果

3.1紫外扫描

3.2分子量测定

讨论

结语

参考文献

文献综述

附图

致谢