电针'合谷'对炎性牙髓痛大鼠牙髓、三叉神经节P2X受体影响的研究

摘要

目的：
　　本实验以大肠杆菌内毒素（Lipopolysaccharides，LPS）诱导的牙髓痛大鼠为研究对象，运用实时定量聚合酶链反应（Real-time polymerase chain reaction，RT-PCR）技术,观测电针合谷对模型大鼠牙髓及三叉神经节中P2X受体亚型 P2X2、P2X3、P2X4的mRNA基因表达的影响，从而深入了解P2X受体在牙髓痛痛信息产生及传递过程中的作用，以期探索电针合谷治疗牙髓痛的可能机制。
　　方法：
　　将牙列正常的健康SD大鼠42只，随机分为6组，分别为正常组、对照组、牙髓痛组、拮抗剂组、电针组、拮抗剂+电针组，每组7只。正常组：不进行任何处理；对照组：用小型手钻(钻头直径约1mm)在大鼠上颌两侧第二磨牙上钻孔,深入牙髓腔并暴露牙髓，用微量注射器注入浓度为5ug/ul的生理盐水(根据大鼠体重每孔注入0.5ul/100g)，浸润5～6min后用牙科填料将牙洞封闭；牙髓痛组：在钻好的大鼠牙髓腔内，注入浓度为5ug/ul的大肠杆菌内毒素（LPS）溶液(根据大鼠体重每孔注入0.5ul/100g),浸润5～6min后用牙科填料将牙洞封闭；拮抗剂组：同牙髓痛组大鼠造模方法，将 A-317491（0.5mg/kg）与 LPS同时注入牙髓腔内，浸润后将牙洞封闭；电针合谷组：同牙髓痛组大鼠造模方法，造模后立即开始电针治疗，选取双侧合谷穴，直刺1-2mm，接 HANS电针治疗仪，连续波，频率2Hz，强度lmA，每次治疗30min，每日1次，共治疗3次。拮抗剂+电针组：同拮抗剂组大鼠造模方法，造模后立即开始电针治疗，选取双侧合谷穴接HANS电针治疗仪，连续波，频率2Hz，强度为1mA，每次治疗30min，每日1次，共治疗3次。所有大鼠均在造模后第3天处死取材。观察大鼠体重和行为学的变化，运用RT-PCR技术检测大鼠牙髓、三叉神经节P2X受体mRNA表达。
　　结果
　　1．各组大鼠体重变化情况：各组大鼠体重均有增长，对照组大鼠的体重增长比正常组慢，且具有显著统计学意义(p<0.01)；牙髓痛组、拮抗剂组、电针组大鼠体重增长比正常组和对照组缓慢，且具有显著统计学意义(p<0.01)；电针组、拮抗剂+电针组大鼠体重增长比牙髓组快，且具有显著统计学意义(p<0.01)；拮抗剂+电针组大鼠体重增长比拮抗剂组及电针组快，且具有显著统计学意义(p<0.01)；电针组大鼠体重增长比拮抗剂组快，且具有显著统计学意义(p<0.01)。
　　2.各组大鼠行为学表现情况：对照组与正常组大鼠皮毛光泽，行动自如，行为学表现虽有差异，但无统计学意义(p>0.05)；牙髓痛组、拮抗剂组、电针组、拮抗剂+电针组行为学表现比正常组和对照组活跃，且具有显著统计学意义（p<0.01）；拮抗剂组、电针组、拮抗剂+电针组行为学表现均与模型组相比较安静，且具有显著统计学意义（p<0.01）。
　　3．各组大鼠P2X2受体mRNA的表达情况
　　各组大鼠牙髓P2X2受体mRNA的表达情况：各组大鼠牙髓均有P2X2受体 mRNA的表达；对照组大鼠牙髓 P2X2受体 mRNA表达量稍高于正常组，但无统计学意义(p>0.05)；牙髓痛组大鼠牙髓P2X2受体mRNA量明显高于正常组、对照组，且具有显著统计学意义(p<0.01)；拮抗剂组、电针组、拮抗剂+电针组大鼠牙髓 P2X2受体 mRNA表达量高于正常组及对照组，且具有统计学意义(p<0.05)；拮抗剂组、电针组、拮抗剂+电针组大鼠牙髓P2X2受体 mRNA表达量明显低于牙髓痛组，且具有显著统计学意义（p<0.01）。
　　各组大鼠三叉神经节P2X2受体mRNA的表达情况：各组大鼠三叉神经节均有P2X2受体mRNA表达；对照组大鼠三叉神经节P2X2受体mRNA表达量稍低于正常组，但无统计学意义(p>0.05)；牙髓痛组、拮抗剂组、电针组、拮抗剂+电针组大鼠P2X2受体mRNA表达量明显高于正常组、对照组，且具有显著统计学意义(p<0.01)；拮抗剂组、电针组、拮抗剂+电针组大鼠三叉神经节 P2X2受体 mRNA表达量低于牙髓痛组，且具有统计学意义（p<0.05）；电针组大鼠三叉神经节P2X2受体mRNA表达量显著高于较拮抗剂+电针组，且具有统计学意义（p<0.05）。
　　4．各组大鼠P2X3受体mRNA的表达情况
　　各组大鼠牙髓P2X3受体mRNA的表达情况：各组大鼠牙髓均有P2X3受体 mRNA表达；对照组大鼠牙髓 P2X3受体 mRNA表达量稍高于正常组，但无统计学意义(p>0.05)；牙髓痛组、拮抗剂组、电针组大鼠牙髓 P2X3受体 mRNA表达量明显高于正常组及对照组，且具有显著统计学意义(p<0.01)；拮抗剂+电针组大鼠牙髓 P2X3受体 mRNA表达量稍高于正常组(p<0.05)；拮抗剂组、电针组、拮抗剂+电针组大鼠牙髓 P2X3受体 mRNA表达量均显著低于模型组，且具有显著统计学意义(p<0.01)；拮抗剂组、拮抗剂+电针组大鼠牙髓 P2X3受体 mRNA表达量均明显低于电针组，且具有显著统计学意义(p<0.01)。
　　各组大鼠三叉神经节P2X3受体mRNA的表达情况：各组大鼠三叉神经节均有P2X3受体mRNA表达；对照组大鼠三叉神经节P2X3受体mRNA表达量稍高于正常组，但无统计学意义(p>0.05)；牙髓痛组、拮抗剂组、电针组大鼠三叉神经节P2X3受体mRNA表达量显著高于正常组，且具有显著统计学意义(p<0.01)；牙髓痛组、拮抗剂组、电针组大鼠三叉神经节P2X3受体mRNA表达量高于对照组，且有统计学意义(p<0.05)；拮抗剂组、电针组、拮抗剂+电针组大鼠三叉神经节 P2X3受体 mRNA表达量明显低于模型组，且具有显著统计学意义(p<0.01)；拮抗剂+电针组大鼠三叉神经节P2X3受体mRNA表达量明显低于电针组，且具有显著统计学意义(p<0.01)。
　　5．各组大鼠P2X4受体mRNA的表达情况
　　各组大鼠牙髓P2X4受体mRNA的表达情况：各组大鼠牙髓均有P2X4受体 mRNA表达；对照组大鼠牙髓 P2X4受体 mRNA表达量稍低于正常组，但无统计学意义(p>0.05)；牙髓痛组、拮抗剂组、电针组、拮抗剂+电针组大鼠牙髓P2X4受体mRNA表达量明显高于正常组及对照组，且具有显著统计学意义（p<0.01）；电针组、拮抗剂+电针组大鼠牙髓 P2X4受体 mRNA表达量低于低于牙髓痛组，且具有显著统计学意义(p<0.01)。
　　各组大鼠三叉神经节P2X4受体mRNA的表达情况：各组大鼠三叉神经节 P2X4受体 mRNA的表达情况：各组大鼠三叉神经节均有 P2X4受体 mRNA表达；对照组大鼠三叉神经节P2X4受体mRNA表达量稍高于与正常组，但无统计学差异(p>0.05)；牙髓痛组、拮抗剂组、电针组、拮抗剂+电针组大鼠三叉神经节P2X4受体mRNA表达量明显高于正常组，且具有显著统计学意义(p<0.01)，牙髓痛组、电针组、拮抗剂+电针组大鼠三叉神经节P2X4受体mRNA表达量高于对照组，且具有统计学意义(p<0.05)；拮抗剂组大鼠三叉神经节P2X4受体mRNA表达量高于对照组，且具有显著统计学意义(p<0.01)；电针组、拮抗剂+电针组大鼠三叉神经节 P2X4受体 mRNA表达量低于牙髓痛组，且具有显著统计学意义(p<0.01)。
　　结论
　　1.P2X受体亚型P2X2、P2X3、P2X4参与LPS诱导的炎性牙髓痛大鼠痛信息的产生和传递。
　　2.电针合谷对炎性牙髓痛大鼠体重和疼痛反应产生影响。
　　3.电针合谷对炎性牙髓痛痛信息产生及传递的影响与 P2X受体亚型P2X2、P2X3、P2X4参与相关。

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中英文缩略词表

前言

1. 材料与方法

1.1实验动物

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器

1.4筛选标准及分组

1.5造模方法

1.6处理方法

1.7样本采集

1.8 Realtime—PCR检测

2. 结果

2.1 各组大鼠体重变化情况

2.2各组大鼠行为学表现情况

2.3各组大鼠P2X2受体mRNA的表达情况

2.4各组大鼠P2X3受体mRNA的表达情况

2.5各组大鼠P2X4受体mRNA的表达情况

讨论

1现代医学对牙髓痛的认识

2中医学对牙髓痛的认识

3. P2X受体亚型P2X2、P2X3、P2X4与炎性牙髓痛痛信息产生与传递的关系

4电针?合谷?对炎性牙髓痛大鼠体重和疼痛反应的影响

5 电针?合谷?对炎性牙髓痛痛信息产生及传递的影响与 P2X 受体亚型P2X2、P2X3、P2X4参与相关

结语

参考文献

附录

1.综述: P2X受体与疼痛的研究进展

致谢