声明
摘要
1 引言
1.1 研究的目的和意义
1.2 文献综述
1.2.1 植物WRKY转录因子研究进展
1.2.2 RNAi干扰研究进展
1.3 本研究的课题来源及研究内
1.3.1 本研究的课题来源
1.3.2 本研究的研究内容及技术路线
2 材料与方法
2.1 GmWRKY20基因RNAi片段设计
2.1.1 试验材料
2.1.2 试验方法
2.2 GmWRKY20基因沉默植物表达载体构建
2.2.1 试验材料
2.2.2 试验方法
2.3 GmWRKY20i对大豆遗传转化及抗性植株获得
2.3.1 试验材料
2.3.2 试验方法
2.4 抗性植株的PCR检测
2.4.1 试验材料
2.4.2 试验方法
2.5 抗性植株RNAi效果的分子生物学验证
2.5.1 试验材料
2.5.2 试验方法
3 结果与分析
3.1 GmWRKY20基因RNAi片段设计
3.2 GmWRKY20基因沉默植物表达载体构建
3.2.1 RNAi片段的克隆
3.2.2 RNAi载体构建
3.3 GmWRKY20i对大豆遗传转化
3.3.1 pBWR植物表达载体对农杆菌的转化
3.3.2 植物表达载体pBWR对大豆转化及抗性植株获得
3.4 抗性植株的PCR检测
3.4.1 转pBWR载体T0代植株的PCR检测
3.4.2 转pBWR载体T1代植株的PCR检测
3.5 抗性植株RNAi效果的分子生物学验证
3.5.1 转pBWR载体T2代植株的RT-PCR检测
3.5.2 PCR阳性植株real-time PCR检测
4 讨论
4.1 基因敲除技术方法的选择
4.2 RNAi技术介导基因沉默需要注意的问题
4.3 GmWRKY20基因介导ABA信号调控抗旱、早花的生理与分子机理
4.4 下一步工作展望
5 结论
5.1 设计出了GmWRKY20基因沉默的RNAi片段并将其转化到大豆东农50中
5.2 获得了四个GmWRKY20基因沉默株系
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文