声明
摘要
1 引言
1.1 GAD概述
1.1.1 GAD的分布与性质
1.1.2 GAD的结构与功能
1.1.3 GAD分离提取的研究概况
1.2 双水相萃取技术概述
1.2.1 双水相萃取的原理
1.2.2 双水相萃取技术的特点
1.2.3 双水相萃取技术的影响因素
1.2.4 双水相萃取技术的研究进展及应用
1.2.5 双水相萃取技术的局限性及展望
1.3 超滤离心的原理与特点
1.4 影响超滤离心的因素
1.5 超滤离心的应用
1.6 研究的工艺流程
1.7 研究的目的与意义
1.8 主要研究内容
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 菌种与培养基
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要设备
2.2 大肠杆菌GAD粗酶液的制备
2.2.1 大肠杆菌细胞的收集
2.2.2 大肠杆菌GAD粗酶液的提取
2.4 PEG-柠檬酸钠双水相萃取GAD体系的构建
2.4.1 PEG-柠檬酸钠双水相相图的建立
2.4.2 PEG-柠檬酸钠双水相萃取GAD体系的建立
2.5 双水相萃取GAD条件的确定
2.5.1 PEG分子量对GAD萃取的影响
2.5.2 PEG浓度对GAD萃取的影响
2.5.3 柠檬酸钠浓度对GAD萃取的影响
2.5.4 pH对GAD萃取的影响
2.5.5 NaCl添加量对GAD萃取的影响
2.6 超滤离心分离GAD与PEG
2.7 GAD与PEG的收集
2.8 检测方法
2.8.1 GAD的活力测定
2.8.2 蛋白质含量的测定
2.8.3 PEG含量测定
2.9 计算方法
2.10 统计分析
3 结果与分析
3.1 PEG-柠檬酸钠双水相体系相图
3.2 PEG-柠檬酸钠双水相萃取GAD条件的确定
3.2.1 PEG分子量对GAD萃取的影响
3.2.2 成相物质的浓度对GAD萃取的影响
3.2.3 pH对GAD萃取的影响
3.2.4 NaCl添加量对GAD萃取的影响
3.3 PEG-柠檬酸钠双水相萃取GAD正交试验
3.4 超滤离心分离GAD与PEG工艺参数的优化
3.4.1 单因素试验
3.4.2 响应面法优化超滤离心的工艺参数
3.5 GAD与PEG的收集
4 讨论
4.1 PEG分子量对GAD萃取的影响
4.2 成相物质浓度对GAD萃取的影响
4.3 pH对GAD萃取的影响
4.4 NaCl添加量对GAD萃取的影响
4.5 超滤离心分离回收GAD与PEG
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文