黄芩苷及NGF对黏菌素致小鼠周围神经毒性的保护作用研究

摘要

近年来，由于多重耐药菌的出现，加之新型抗菌药研制的速度有限，使得原来因肾毒性和神经毒性被淘汰的黏菌素(colistin)重新被人们重视起来。黏菌素可有效治疗革兰氏阴性杆菌引起的感染，尤其可对抗多重耐药菌引起的感染，但黏菌素所引起的神经毒性严重影响了其治疗效果。本课题前期研究通过模拟临床给药，静脉注射硫酸黏菌素，建立了小鼠神经毒性模型，结果显示:黏菌素导致小鼠感觉及运动功能失调，其中热痛阈值及感觉神经传导速率(SNCV)敏感，黏菌素致小鼠神经毒性重要机制之一为线粒体氧化应激途径。 黄芩苷(baicalin)是从黄芩的干燥根提取的一种黄酮类化合物，具有多种药理作用，如抗氧化、保护神经、抗肿瘤、镇静、抗病原微生物、免疫调节、抗炎症、保肝利胆、抗过敏等。目前对黄芩苷神经保护的研究主要集中在对脑神经的保护，但尚未见其对黏菌素所引起的周围神经毒性的保护作用研究。 神经生长因子(NGF)属于神经营养因子家族，并且是神经营养因子家族中研究最为透彻的一种，其中NGF包括两种受体，即酪氨酸激酶受体和非酪氨酸型P75受体，NGF与受体结合之后发挥其生物效应。神经生长因子对中枢和周围神经都具有保护作用。但有关NGF保护黏菌素所诱导的神经毒性的研究甚少。 本实验通过设定正常组（生理盐水）、模型组(静脉注射黏菌素15mg/kg)、黄芩苷高剂量组(200mg/kg baicalin+15mg/kg colistin)、黄芩苷中剂量组(100mg/kg baicalin+15mg/kgcolistin)黄芩苷低剂量组(50mg/kg baicalin+15mg/kg colistin)、NGF组(20μg/kg NGF+15mg/kgcolistin6个剂量组，连续给药7d后，进行一般指标(精神状态观察、体重变化)测定、神经行为学指标测定（步态分析、网格试验、热觉传导试验）、氧化-抗氧化指标测定(MDA、SOD、CAT、GSH)、坐骨神经组织中凋亡相关因子表达（P53和BAX）的检测及MBP蛋白表达的测定。结果表明: 通过一般性指标、神经行为学指标、电生理指标测定发现，与模型组比较，黄芩苷干预组及NGF组小鼠的精神状态可明显改善，体重增加，小鼠的感觉神经功能损伤明显减轻，感觉神经传导速率增加。NGF能明显增强黏菌素小鼠的运动神经功能，但黄芩苷对小鼠的运动神经功能影响不大，可能是因为黄芩苷的保护作用具有剂量依赖性。 通过测定小鼠血清和坐骨神经中氧化抗氧化指标，表明黄芩苷及NGF均能明显降低氧化指标的活性，提高小鼠的抗氧化能力。 通过western Blot试验检测坐骨神经中凋亡相关因子P53和BAX蛋白表达量，表明黄芩苷干预组及NGF组这两种蛋白的表达明显降低。 通过western Blot试验检测坐骨神经中碱性髓鞘蛋白(MBP)的表达量，表明黄芩苷干预组及NGF组的MBP蛋白表达降低。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 黏菌素概述

1．1．1 黏菌素的结构及理化性质

1．1．2 黏菌素的神经毒性研究进展

1．1．3 黏菌素的肾毒性研究进展

1．1．4 黏菌素的抗菌活性及机制研究概述

1．1．5 黏菌素的药动学概述

1．1．6 黏菌素的耐药机制及发生率

1．2 黄芩苷

1．2．1 黄芩苷概述

1．2．2 黄芩苷药理作用

1．2．3 黄芩苷神经保护作用的机制及研究进展概述

1．3 神经生长因子(NGF)

1．3．1 神经生长因子概述

1．3．2 神经生长因子药理作用

1．3．3 神经生长因子临床应用

1．3．4 神经生长因子神经保护机制概述

1．4 本实验的目的与意义

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 主要试剂

2．1．2 主要仪器

2．1．3 主要试剂的配制

2．1．4 实验动物

2．2 试验方法

2．2．1 小鼠一般性指标检测

2．2．2 神经行为学测定实验

2．2．3 神经电生理

2．2．4 小鼠血清及坐骨神经中氧化-抗氧化系统指标的测定

2．2．5 小鼠坐骨神经线粒体途径凋亡相关蛋白表达

2．2．6 数据处理

3 结果与分析

3．1 一般指标检测结果

3．2 神经行为学结果分析

3．2．1 步态分析

3．2．2 网格试验

3．2．3 热党传导功能试验

3．3 神经电生理试验

3．4 氧化-抗氧化试验

3．4．1 血清氧化-抗氧化指标的测定

3．4．2 坐骨神经中氧化-抗氧化指标的测定

3．5 Western Blot检测P53蛋白表达

3．6 Western Blot检测BAX蛋白表达

3．7 Western Blot检测MBP表达

4 讨论

4．1 线粒体凋亡相关因子P53、BAX与黏菌素神经毒性的关系

4．2 碱性髓鞘蛋白与黏菌素神经毒性的关系

4．3 黄芩苷对黏菌素神经毒性的保护作用

4．4 神经生长因子对黏菌素神经毒性的保护作用

4．5 神经生长因子及黄芩苷在神经保护作用方面的比较

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文