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α--突触核蛋白基因在AVM致王鸽脑神经细胞凋亡中的作用研究

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摘要

1 前言

1.1 阿维菌素应用与环境污染

1.2 AVMs毒理学研究进展

1.2.1 神经递质与AVMs毒理学

1.2.2 氧化应激与AVMs毒理学

1.2.3 细胞凋亡与AVMs毒理学

1.2.4 细胞色素P450(CYP 450)与AVMs毒理学

1.3 细胞凋亡与神经系统疾病

1.4 α-突触核蛋白及其神经细胞毒性作用

1.4.1 α-突触核蛋白

1.4.2 α-Syn可诱导细胞凋亡

1.4.3 α-Syn影响囊泡运输

1.4.4 α-Syn的生物膜毒性

1.4.5 α-Syn的线粒体毒性

1.4.6 α-Syn的溶酶体和蛋白酶体毒性

1.5 细胞因子与神经毒理学

1.6 热休克蛋白与神经毒理学

1.7 试验的目的与意义

2 材料与方法

2.1 主要的仪器、试剂及配制

2.1.1 主要的仪器

2.1.2 主要试剂

2.1.3 试剂盒

2.1.4 主要试剂的配制

2.2 美国王鸽AVM亚慢性中毒模型的复制与样品采集

2.3 鸽胚脑神经细胞的培养条件优化、鉴定及处理

2.3.1 鸽胚脑神经细胞培养条件的优化

2.3.2 鸽胚脑神经细胞鉴定

2.3.3 鸽胚脑神经细胞的染毒处理

2.4 α-Syn基因RNA干扰条件的建立

2.4.1 Stealth RNA的设计与制备

2.4.2 Stealth RNA转染条件的优化

2.4.3 Stealth RNA干扰引物的筛选

2.5 AVM对鸽胚脑神经细胞半数致死效应的检测

2.6 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞凋亡相关指标检测

2.6.1 TUNNEL法检测细胞凋亡率

2.6.2 HOECHST染色法检测细胞凋亡率

2.6.3 凋亡相关基因的mRNA表达检测

2.6.4 凋亡相关基因的蛋白表达检测

2.7 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞α-Syn基因及UPP通路水解酶活性检测

2.7.1 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞α-Syn基因表达检测

2.7.2 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞UPP通路水解酶活性检测

2.8 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞细胞因子相关基因mRNA表达检测

2.9 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞热休克蛋白相关基因表达检测

2.10 试验数据的统计分析

3 结果与分析

3.1 优化培养后不同时期鸽胚脑神经细胞形态学观察结果

3.2 优化培养的鸽胚脑神经细胞免疫学鉴定结果

3.3 α-Syn基因RNA干扰条件的建立

3.3.1 Stealth RNA转染条件的优化

3.3.2 α-Syn Stealth RNA干扰引物的筛选

3.4 AVM对鸽胚脑神经细胞半数致死效应检测结果

3.5 敲低α-Syn基因对AVM致鸽脑神经细胞凋亡的影响

3.5.1 AVM诱导鸽胚脑神经细胞凋亡的TUNNEL检测结果

3.5.2 敲低α-Syn基因前后AVM诱导鸽胚脑神经细胞凋亡的HOECHST检测结果

3.5.3 敲低α-Syn基因前后凋亡相关基因的表达变化

3.6 AVM染毒对鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞α-Syn基因表达及UPP通路水解酶活性影响

3.6.1 AVM染毒对鸽脑组织α-Syn基因表达及UPP通路水解酶活性影响

3.6.2 AVM染毒对鸽胚脑神经细胞α-Syn基因表达及UPP通路水解酶活性影响

3.7 敲低α-Syn基因对AVM染毒条件下鸽脑神经细胞细胞因子相关基因mRNA表达的影响

3.7.1 AVM染毒对鸽脑组织细胞因子相关基因mRNA表达的影响

3.7.2 敲低α-Syn基因前后AVM染毒对鸽胚脑神经细胞细胞因子相关基因mRNA表达的影响

3.8 敲低α-Syn基因对AVM染毒条件下鸽脑神经细胞热休克蛋白相关基因表达的影响

3.8.1 AVM染毒对鸽脑组织热休克蛋白相关基因表达的影响

3.8.2 敲低α-Syn基因前后AVM染毒对鸽胚脑神经细胞热休克蛋白相关基因表达的影响

4 讨论

4.1 神经细胞的优化培养及鉴定

4.2 α-Syn基因干扰条件的建立

4.3 敲低α-Syn基因对AVM致鸽脑神经细胞凋亡的影响

4.3.1 AVM染毒对鸽胚脑神经细胞凋亡率的影响

4.3.2 AVM染毒对鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞凋亡相关基因表达的影响

4.3.3 AVM染毒对鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞α-Syn基因表达的影响

4.3.4 敲低α-Syn基因对AVM致鸽胚脑神经细胞凋亡的影响

4.4 敲低α-Syn基因对AVM染毒条件下鸽脑神经细胞细胞因子相关基因mRNA表达的影响

4.5 AVM染毒对鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞UPP通路水解酶活性影响

4.6 敲低α-Syn基因对AVId染毒条件下鸽脑神经细胞热休克蛋白相关基因mRNA表达的影响

5 结论

致谢

参考文献

攻读博士学位期间发表的学术论文

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