声明
摘要
1 前言
1.1 阿维菌素应用与环境污染
1.2 AVMs毒理学研究进展
1.2.1 神经递质与AVMs毒理学
1.2.2 氧化应激与AVMs毒理学
1.2.3 细胞凋亡与AVMs毒理学
1.2.4 细胞色素P450(CYP 450)与AVMs毒理学
1.3 细胞凋亡与神经系统疾病
1.4 α-突触核蛋白及其神经细胞毒性作用
1.4.1 α-突触核蛋白
1.4.2 α-Syn可诱导细胞凋亡
1.4.3 α-Syn影响囊泡运输
1.4.4 α-Syn的生物膜毒性
1.4.5 α-Syn的线粒体毒性
1.4.6 α-Syn的溶酶体和蛋白酶体毒性
1.5 细胞因子与神经毒理学
1.6 热休克蛋白与神经毒理学
1.7 试验的目的与意义
2 材料与方法
2.1 主要的仪器、试剂及配制
2.1.1 主要的仪器
2.1.2 主要试剂
2.1.3 试剂盒
2.1.4 主要试剂的配制
2.2 美国王鸽AVM亚慢性中毒模型的复制与样品采集
2.3 鸽胚脑神经细胞的培养条件优化、鉴定及处理
2.3.1 鸽胚脑神经细胞培养条件的优化
2.3.2 鸽胚脑神经细胞鉴定
2.3.3 鸽胚脑神经细胞的染毒处理
2.4 α-Syn基因RNA干扰条件的建立
2.4.1 Stealth RNA的设计与制备
2.4.2 Stealth RNA转染条件的优化
2.4.3 Stealth RNA干扰引物的筛选
2.5 AVM对鸽胚脑神经细胞半数致死效应的检测
2.6 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞凋亡相关指标检测
2.6.1 TUNNEL法检测细胞凋亡率
2.6.2 HOECHST染色法检测细胞凋亡率
2.6.3 凋亡相关基因的mRNA表达检测
2.6.4 凋亡相关基因的蛋白表达检测
2.7 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞α-Syn基因及UPP通路水解酶活性检测
2.7.1 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞α-Syn基因表达检测
2.7.2 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞UPP通路水解酶活性检测
2.8 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞细胞因子相关基因mRNA表达检测
2.9 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞热休克蛋白相关基因表达检测
2.10 试验数据的统计分析
3 结果与分析
3.1 优化培养后不同时期鸽胚脑神经细胞形态学观察结果
3.2 优化培养的鸽胚脑神经细胞免疫学鉴定结果
3.3 α-Syn基因RNA干扰条件的建立
3.3.1 Stealth RNA转染条件的优化
3.3.2 α-Syn Stealth RNA干扰引物的筛选
3.4 AVM对鸽胚脑神经细胞半数致死效应检测结果
3.5 敲低α-Syn基因对AVM致鸽脑神经细胞凋亡的影响
3.5.1 AVM诱导鸽胚脑神经细胞凋亡的TUNNEL检测结果
3.5.2 敲低α-Syn基因前后AVM诱导鸽胚脑神经细胞凋亡的HOECHST检测结果
3.5.3 敲低α-Syn基因前后凋亡相关基因的表达变化
3.6 AVM染毒对鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞α-Syn基因表达及UPP通路水解酶活性影响
3.6.1 AVM染毒对鸽脑组织α-Syn基因表达及UPP通路水解酶活性影响
3.6.2 AVM染毒对鸽胚脑神经细胞α-Syn基因表达及UPP通路水解酶活性影响
3.7 敲低α-Syn基因对AVM染毒条件下鸽脑神经细胞细胞因子相关基因mRNA表达的影响
3.7.1 AVM染毒对鸽脑组织细胞因子相关基因mRNA表达的影响
3.7.2 敲低α-Syn基因前后AVM染毒对鸽胚脑神经细胞细胞因子相关基因mRNA表达的影响
3.8 敲低α-Syn基因对AVM染毒条件下鸽脑神经细胞热休克蛋白相关基因表达的影响
3.8.1 AVM染毒对鸽脑组织热休克蛋白相关基因表达的影响
3.8.2 敲低α-Syn基因前后AVM染毒对鸽胚脑神经细胞热休克蛋白相关基因表达的影响
4 讨论
4.1 神经细胞的优化培养及鉴定
4.2 α-Syn基因干扰条件的建立
4.3 敲低α-Syn基因对AVM致鸽脑神经细胞凋亡的影响
4.3.1 AVM染毒对鸽胚脑神经细胞凋亡率的影响
4.3.2 AVM染毒对鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞凋亡相关基因表达的影响
4.3.3 AVM染毒对鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞α-Syn基因表达的影响
4.3.4 敲低α-Syn基因对AVM致鸽胚脑神经细胞凋亡的影响
4.4 敲低α-Syn基因对AVM染毒条件下鸽脑神经细胞细胞因子相关基因mRNA表达的影响
4.5 AVM染毒对鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞UPP通路水解酶活性影响
4.6 敲低α-Syn基因对AVId染毒条件下鸽脑神经细胞热休克蛋白相关基因mRNA表达的影响
5 结论
致谢
参考文献
攻读博士学位期间发表的学术论文