2-甲氧基雌二醇及其羟丙基-β-环糊精包含物细胞药效和药动学初步研究

摘要

背景及目的:2-甲氧基雌二醇(2-ME)是雌激素的生理性代谢产物，但本身几乎没有雌激素活性，近年来研究发现其具有较好的抗肿瘤活性。由于其水溶性低，口服吸收差，易代谢，因而将其制成各种制剂来提高其药用价值。本文就对其原料药及其羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）包合物对四种肿瘤细胞的抑制作用进行比较研究;初步探索原料药和制剂细胞内的代谢动力学规律;探讨原料药和制剂进入细胞的机制和细胞外排机制。整体评价制剂的作用效果，并为2-甲氧基雌二醇的制剂研究提供理论依据。
　　 方法:本实验采用磺酰基罗丹明B(SRB)法测定原料药及制剂对肿瘤细胞生长情况的影响;采用流式细胞术(FCM)检测原料药及制剂对MCF-7细胞的周期阻滞情况;应用荧光Hoechst33342/PI双染法检测MCF-7细胞凋亡情况;采用HPLC-FLD进行细胞内药物含量测定及细胞内药物代谢动力学规律探索;利用能量抑制剂叠氮钠(NaN3)及P-糖蛋白抑制剂环孢素A(CyA)初步探索原料药和制剂进入细胞及细胞外排机制。
　　 结果:实验结果表明:2-ME及2-ME/HP-β-CD包合物对PC-3、SGC-7901、HepG2细胞的生长具有良好的抑制作用，并呈现出一定的时间和浓度依赖性。而对于MCF-7细胞，只有原料药对其增殖抑制具有时间依赖性、浓度依赖性;而制剂只有浓度依赖性却不具有时间依赖性。通过研究药物作用下MCF-7细胞周期阻滞和凋亡情况，发现制剂与原料药对MCF-7细胞作用机制基本相同。细胞动力学研究表明:四种细胞对原料药的代谢规律基本相同。对MCF-7、PC-3两种细胞进行原料药和制剂的代谢规律进一步研究，发现PC-3细胞对原料药和制剂的代谢规律基本相同;MCF-7细胞则有差别，说明不同细胞代谢机制可能不完全相同。以PC-3，MCF-7两种细胞为研究对象，对原料药及制剂入胞及外排机制进行研究，结果表明:两者进入细胞方式均为不耗能的被动转运，外排则都不受P-糖蛋白的介导。
　　 结论:通过实验说明制剂在改变原料药不良物理特性的同时，对于原料药的药效及作用机制并没有改变，但却改变了一些细胞内的药物代谢动力学规律。

目录

声明

摘要

英文缩略词

前言

第一章 2-甲氧基雌二醇及其羟丙基-β-环糊精包合物对不同细胞系的抑制作用

1 材料与仪器

1．1 药品

1．2 试剂

1．3 细胞系

1．4 仪器

2 2-甲氧基雌二醇／羟丙基-β-环糊精包合物的制备、表征及含量测定

2．1 实验方法

2．2 实验结果

3 细胞培养基本操作

3．1 试剂的配制

3．2 细胞培养的基本操作

4 2-甲氧基雌二醇及其羟丙基-β-环糊精包合物细胞毒性实验

4．1 细胞毒性实验试剂的配制

4．2 细胞毒性试验方法

4．3 实验结果及讨论

5 2-甲氧基雌二醇及其羟丙基-β-环糊精包合物对MCF-7细胞周期和凋亡的影响

5．1 试剂的配制

5．2 实验方法

5．3 实验结果及讨论

6 本章总结

第二章 细胞中2-甲氧基雌二醇的含量测定方法

1 材料与仪器

1．1 试剂

1．2 仪器

2 实验方法

2．1 试剂的配制

2．2 细胞破碎液制备

2．3 样品处理

2．4 色谱条件

2．5 分析方法的验证

3 实验结果

3．1 专属性

3．2 标准曲线及定量下限

3．3 精密度

3．4 准确度

3．5 提取回收率

3．6 稳定性

4 本章总结

第三章 2-甲氧基雌二醇及其羟丙基-β-环糊精包合物细胞内动力学研究

1 材料与仪器

1．1 药品

2 实验方法

2．1 药品的配制

2．2 四种细胞内2-甲氧基雌二醇药代动力学初步考察

2．3 2-甲氧基雌二醇及其羟丙基-β-环糊精包合物在PC-3及MCF-7细胞内的动力学考察

2．4 2-甲氧基雌二醇及其羟丙基-β-环糊精包合物入胞及外排机制初步探索

3 实验结果及讨论

3．1 四种细胞内2-甲氧基雌二醇药代动力学初步考察

3．2 2-甲氧基雌二醇及其羟丙基-β-环糊精包合物在PC-3及MCF-7细胞内的动力学考察

3．3 2-甲氧基雌二醇及其羟丙基-β-环糊精包合物入胞及外排机制初步探索

4 本章总结

第四章 全文总结

参考文献

综述

个人简历

致谢