血管性痴呆大鼠海马中脑源性营养因子各亚型的变化与认知关系

摘要

研究背景：
　　随着平均寿命的增加，血管性痴呆（VD）的发病率也逐渐增加,并引起医学领域及社会的关注。目前尚没有针对VD的药物且其发病机制商不清楚，故有关VD的研究也成为了目前的研究热点。脑源性神经营养因子（BDNF）是一种神经生长因子，广泛存在于哺乳动物脑内，与学习记忆密切相关。BDNF最初是以蛋白前体（pro-BDNF）的形式合成，随后裂解为截短型BDNF和成熟型BDNF（mBDNF）。研究发现脑缺血后脑组织内存在着BDNF表达的变化。近期研究发现三种形式的BDNF均与认知功能有关。但目前对BDNF的研究主要在mBDNF，这三种蛋白在VD中的变化尚不清楚。故本研究拟通过细胞和动物模型，探讨三种BDFN蛋白，pro-BDNF、截短型BDNF和mBDNF，在VD中的变化.
　　第一部分糖氧剥夺后海马神经元中脑源性神经营养因子各亚型的变化
　　目的：
　　观察对体外培养海马神经元建立糖氧剥夺损伤模型后pro-BDNF、mBDNF和截短型BDNF的变化，通过体外实验探讨pro-BDNF、mBDNF和截短型BDNF在血管性痴呆中的变化。
　　方法：
　　提取新生大鼠大脑海马神经元体外培养,随机分为对照组和实验组，培养7天后实验组糖氧剥夺（OGD）处理，实验组分为OGD处理30min、6h、12h、24h4个时间点。MTT检测OGD处理后细胞活性。Westernblot方法测定不同时间点海马神经元中pro-BDNF、mBDNF、截短型BDNF变化。
　　结果：
　　1.经OGD处理后海马神经元细胞活性降低（P＜0.05），且随OGD处理时间延长海马神经元细胞活性降低越明显（P＜0.05）。
　　2.与对照组相比：mBDNF在OGD处理30min时间点有短暂的升高，随后持续降低（F=10.496，P=0.000）；截短型BDNF蛋白含量持续降低（F=31.641，P=0.000），pro-BDNF在OGD处理后蛋白含量先升高后降低，30min、6h蛋白含量逐渐升高，12h时较6h减少但仍高于对照组，OGD处理24h蛋白量开始低于对照组（F=16.246，P=0.000）。
　　结论：
　　1．神经元缺血缺氧损伤后细胞活性降低，损伤持续时间越长，细胞活性降低越明显。
　　2．海马神经元在缺血缺氧性损伤后pro-BDNF、mBDNF和截短型BDNF含量均发生改变，三者比例明显发生改变。
　　第二部分血管性痴呆大鼠海马中脑源性神经营养因子各亚型的变化
　　目的：
　　探讨血管性痴呆（VD）大鼠海马中脑源性神经营养因子前体蛋白（pro-BDNF）、成熟BDNF（mBDNF）、截短型BDNF变化与认知功能关系。
　　方法：
　　健康雄性SD大鼠120只，6月龄，体重350g左右，随机分为模型组和假手术组，模型组结扎双侧颈总动脉，假手术组的处理除不结扎血管外余同模型组，模型组和假手术组大鼠随机分为2周、4周、8周、12周4个时间点，水迷宫实验筛选造模成功大鼠，对假手术组大鼠及造模成功的大鼠进行免疫组化和western印记方法检测不同时间点海马中pro-BDNF、mBDNF、截短型BDNF变化。
　　结果：
　　1.VD模型建立结果：建立模型组大鼠65只，死亡16只；建立假手术组大鼠55只，死亡4只。
　　2.各组大鼠行为学检测结果：与假手术组相比，模型组大鼠潜伏期明显延长，差异明显（P＜0.05），表明模型组大鼠学习记忆能力受损，出现一定的认知功能障碍。模型组内单因素方差分析示：F=14.63，P=0.000，表明随缺血时间延长，认知功能障碍逐渐加重。
　　3.免疫组织化学检测结果：与免疫组化检测示模型组海马区神经元胞体变大、轮廓清晰度减退、神经元数量减少，随缺血时间延长细胞阳性率降低越明显。
　　4.Westernblot结果：组间比较：模型组pro-BDNF在缺血早期减少不明显，缺血晚期明显低于假手术组（P＜0.05）；截短型BDNF在缺血早期就开始减少（P＜0.05）；mBDNF在缺血晚期明显减少（P＜0.05），早期减少不明显。假手术组组内差异不明显（P＞0.05）。模型组组内分析发现：模型组pro-BDNF的下降趋势较缓（相邻时间点间差异P＞0.05）；截短型BDNF的下降趋势在2周和4周间最明显（P＜0.05）；mBDNF的下降趋势在8周后较明显（P＜0.05）。
　　结论：
　　1．在慢性缺血VD大鼠海马区BDNF的表达及表达后加工会出现异常。
　　2．pro-BDNF、mBDNF和截短型BDNF比例的改变可能与VD大鼠认知功能减退有关：在VD大鼠早期，认知功能减退可能与截短型BDNF减少关系密切，在晚期可能与mBDNF的减少关系密切。

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中英文缩略词

前言

第一部分 糖氧剥夺后海马神经元中脑源性神经营养因子各亚型的变化

材料与方法

实验结果

讨论

结论

附图

第二部分 血管性痴呆大鼠海马中脑源性神经营养因子各亚型的变化

材料与方法

实验结果

讨论

结论

附图

参考文献

综述:脑源性神经营养因子与血管性痴呆相关性研究进展

个人简历、研究生期间写的论文

致谢