溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)是一种主要累及直肠、结肠黏膜的慢性非特异性炎症。其发病机制尚不十分明确，一般认为与遗传、环境及免疫反应异常有关，其中免疫应答异常与免疫调节失衡被认为是UC发病的重要环节。 树突状细胞(Dendritic cells，DCs)是体内功能最强并且是唯一能活化初始型T细胞的专职抗原呈递细胞(Antigenpresenting cell，APC)。DCs表面有大量与功能相关的表面分子，S-100蛋白可以作为局部组织中DCs的标志。DCs活化初始T细胞的能力依赖于它的成熟状态，CD83是成熟DCs表达的一种相对特异性表面分子。 Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)是新近发现的先天性免疫重要的跨膜受体和信号转导受体，在巨噬细胞、DCs等APC表面表达尤其丰富。脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)及细菌脂肽可通过TLR2刺激DCs成熟。 目前，关于TLRs及其下游信转导分子的研究较多，对其上游信号转导分子研究较少。酪氨酸激酶(Janus tyrosinekinase，JAK)/信号转导和转录激活因子(Signal transducer andactivator of transcription，STAT)是细胞信号转导的重要通路之一，参与UC的发生。UC患者结肠黏膜中STAT3及磷酸化STAT3的表达高于正常结肠黏膜。有研究发现在TLR2启动子上存在一个STAT结合位点，致病因子可能通过活化STAT3直接调节了TLR2基因表达。 目的：通过研究UC患者结肠黏膜中DCs的分布及TLR2的表达与临床活动度及内镜分级的关系，探讨其在UC发病机制中的作用。 方法： 收集UC病例及正常对照结肠镜活检标本。入选病例根据Truelove-Witts标准按内镜下活动度分为Ⅰ级组8例、Ⅱ级组22例、Ⅲ级组17例；根据“2000年成都全国炎症性肠病学术会议”制订的溃疡性结肠炎诊断标准按临床活动度分为轻度组15例、中度组23例、重度组9例。 应用免疫组织化学法检测结肠黏膜中以S-100及CD83为标志的DCs的分布；应用Western Blot技术和半定量反转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chainreaction，RT-PCR)方法检测结肠黏膜中TLR2蛋白及TLR2mRNA的表达。 结果： 1 UC患者基本资料分析及结肠黏膜病理学改变47例UC患者中26例主要临床表现为黏液脓血便，14例主要表现为血便，7例仅表现为腹痛，8例有发热表现。 结肠镜检查可见中、重度患者结肠黏膜充血、水肿，有糜烂、溃疡形成，多有脓性或脓血性黏液附着，轻度患者结肠黏膜高度充血、水肿，呈颗粒感，质脆，易出血，4例患者黏膜有炎性息肉形成。 光学显微镜下发现对照组结肠黏膜腺体排列整齐，隐窝、表面上皮完整，黏膜固有层有少量炎性细胞浸润；UC组结肠黏膜充血、水肿，有糜烂、溃疡形成，黏膜杯状细胞减少或消失，腺体萎缩，大量炎性细胞浸润，并可见隐窝脓肿形成，有息肉形成者可见不典型增生及纤维结缔组织形成。 2 UC患者结肠黏膜S-100的表达免疫组织化学染色显示：S-100阳性细胞主要位于黏膜固有层，光镜下免疫组织化学反应产物呈棕黄色，主要位于细胞质，正常对照组结肠黏膜固有层S-100弱表达。 与正常对照组比较，Ⅰ级组、Ⅱ级组及Ⅲ级组患者结肠黏膜中S-100阳性细胞数明显增多，染色强度增强；Ⅰ级组与正常对照组比较无明显差异(23.31 vs 16.00)，P>0.05；Ⅱ级组、Ⅲ级组较正常对照组明显增强(23.31 vs 16.00，32.61.vs16.00.)，P<0.01.；Ⅰ级组与Ⅲ级组比较有明显差异(23.31 vs42.24)，P<0.01，Ⅱ级与Ⅰ级组及Ⅲ级组之间无明显差异(23.31. vs 32.61，32.61 vs 42.24)，P>0.05。 轻度组、中度组及重度组患者结肠黏膜中S-100的表达强度均显著高于正常对照组(30.13 vs 16.00，34.43 vs 16.00，42.00 vs 16.00)，P<0.01；轻度组、中度组及重度组之间无明显差异，P>0.05。 3 UC患者结肠黏膜CD83的表达CD83阳性细胞主要位于黏膜固有层，呈棕黄色，主要位于细胞质，正常对照组结肠黏膜固有层CD83弱表达或不表达。 与正常对照组比较，Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组患者结肠黏膜中CD83的表达强度逐渐递增；Ⅰ级组与正常对照组比较无明显差异(19.00 vs 16.00)，P>0.05；Ⅱ级组、Ⅲ级组与正常对照组比较有明显差异(34.14 vs 16.00，42.29 vs 16.00)，P<0.01；Ⅱ级组、Ⅲ级组与Ⅰ级组比较有明显差异(34.14 vs19.00，42.29 vs 19.00)，P<0.01；Ⅱ级组与Ⅲ级组比较无明显差异(34,14 vs 42.29)，P>0.05。轻度组、中度组及重度组患者结肠黏膜中CD83的表达强度均显著高正常对照组(30.10 vs 16.00，33.76 vs 16.00，43.78 vs 16.00)，P<0.01；轻度组、中度组及重度组之间无明显差异，P>0.05。 4 结肠黏膜中TLR2蛋白表达Western blot分析显示，在大约90 kD位置出现TLR2特异性条带。正常对照组有少量TLR2蛋白表达，Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组患者结肠黏膜中TLR2蛋白含量逐渐增加；正常对照组与I级组之间无明显差异(15.77 vs 15.94)，P>0.05；Ⅱ级组及Ⅲ级组与正常对照组比较有显著性差异(29.48 vs15.77，49.94 vs 15.77)，P<0.01；Ⅰ级组、Ⅱ级组及Ⅲ级组之间有显著性差异，P<0.01。 与正常对照组比较，轻度组、中度组、重度组患者结肠黏膜中TLR2蛋白含量逐渐增加；正常对照组与轻度组之间无明显差异(17,07 vs 15.77),P>0.05；中度组及重度组与正常对照组比较有显著性差异(39.26 vs 15.77，51.98 vs 15.77)，P<0.01；轻度组、中度组及重度组之间有显著性差异，P<0.01。 5 结肠黏膜中TLR2 mRNA表达RT-PCR共扩增检测TLR2和内参照β-actin基因表达，正常对照组及病例组在223 bp处均出现了特异性的TLR2基因条带；在500 bp处出现了内参照β-actin的特异条带。TLR2电泳条带的光密度扫描显示，正常对照组有TLR2 mRNA表达，Ⅰ级组、Ⅱ级组及Ⅲ级组患者结肠黏膜中TLR2 mRNA表达依次增加；正常对照组与Ⅰ级组之间无明显差异(16.75vs 11.38)，P>0.05；Ⅱ级组及Ⅲ级组与正常对照组比较有显著性差异(32.61 vs 11.38，48.85 vs 11.38)，P<0.01；Ⅰ级组、Ⅱ级组及Ⅲ级组之间有显著性差异，P<0.01。与正常对照组比较，轻度组、中度组、重度级组患者结肠黏膜中TLR2 mRNA表达呈递增趋势(28.93 vs 11.38，32.37vs 11.38，55.94 vs 11.38)，P<0.01；轻度组与中度组之间无明显差异(28.93 vs 32.37)，P>0.05 1轻度组及中度组与重度组之间有显著性差异(28.93 vs 55.94，32.37 vs 55.94)，P<0.01。 6 结肠黏膜中pSTAT3蛋白表达Western blot分析显示，在大约90 kD位置出现pSTAT3特异性条带。正常对照组有少量pSTAT3蛋白表达，Ⅰ级组、Ⅱ级组及Ⅲ级组患者结肠黏膜中pSTAT3蛋白含量逐渐增加(17.75 vs 7.00，33.61 vs 7.00，50.44 vs 7.00)，P<0.01；Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组之间有显著性差异，P<0.01。 与正常对照组相比轻度组、中度组及重度组患者结肠黏膜中pSTAIB蛋白含量呈递增趋势(21.70 vs 7.00，42.33 vs7.00，48.89 vs 7.00)，P<0.01；重度组与轻度组及中度组相比有显著性差异，P<0.01;中度组与重度组之间无显著性差异，P>0.05。 7 对pSTAT3及TLR2进行Spearman相关分析：pSTAT3和TLR2之间呈正相关r=0.716，P<0.01。 结论： 与正常对照组相比UC患者结肠黏膜固有层中S-100和CD83表达上调，在一定程度上反映了临床活动度和内镜分级；TLR2蛋白、TLR2 mRNA及pSTAT3，在UC患者肠黏膜中表达较正常对照组增加，在一定程度上反映了临床活动度和内镜分级；TLR2与pSTAT3的表达呈正相关。DCs与TLR2表达异常可能参与了UC的发生发展。
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