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声明
1引言
2材料与方法
2.1材料
2.1.1病毒及抗体
2.1.2试验用鸡
2.1.3菌种与质粒载体
2.1.4试验所需酶及主要试剂
2.1.5主要仪器
2.1.6试验所需主要溶液及其配制
2.2方法
2.2.1引物设计与合成
2.2.2病毒的增殖
2.2.3病毒基因组的提取
2.2.4 PCR扩增EDSV Hexon基因
2.2.5 PCR产物的凝胶回收纯化
2.2.6 PCR产物的克隆
2.2.7重组克隆载体的鉴定
2.2.8目的基因的序列测定及序列分析
2.2.9目的基因原核表达载体的构建
2.2.10阳性克隆的筛选及鉴定
2.2.11Hexon基因的表达
2.2.12重组蛋白表达条件的优化
2.2.13重组蛋白的大量表达
2.2.14表达蛋白溶解性的判定
2.2.15从包涵体中纯化表达蛋白
2.2.16表达重组蛋白的动物免疫
2.2.17间接ELISA方法检测免疫鸡抗体水平
3结果与分析
3.1鸡EDSV-HB株Hexon基因的PCR扩增
3.2 PCR方法鉴定阳性克隆
3.3重组质粒测序鉴定及遗传变异分析
3.4重组表达质粒pET-H的酶切鉴定
3.5重组蛋白的表达
3.6 Western-blotting鉴定分析
3.7不同诱导温度对重组蛋白表达量的影响
3.8不同诱导时间对重组蛋白表达量的影响
3.9不同IPTG浓度对重组蛋白表达量的影响
3.10表达蛋白的溶解性判定试验
3.11表达蛋白的纯化
3.12间接ELISA方法检测重组蛋白免疫试验鸡后抗体水平
3.12.1重组蛋白抗原最适包被浓度的确定
3.12.2免疫鸡抗重组蛋白血清效价的检测
4讨论
5结论
参考文献
在读期间发表论文
作者简介
致谢