调补肺肾三法对COPD大鼠T淋巴细胞亚群的调控作用及远后效应

摘要

目的
　　1 评价调补肺肾三法(包括补肺健脾、补肺益肾和益气滋肾法)对COPD的疗效及其远后效应,并探讨其作用特点。
　　2 基于调补肺肾三法对稳定期COPD大鼠细胞免疫功能的影响及远后效应,探讨补肺健脾方、补肺益肾方和益气滋肾方治疗COPD的机制,并揭示其远后效应机制。
　　方法
　　大鼠随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组和氨茶碱组,每组20只。采用香烟熏吸联合反复细菌感染的方法制备COPD稳定期大鼠模型,于第9周开始,对照组、模型组给予生理盐水灌胃,其余各组分别给予相应药物,给药至第20周结束时,半数取材,剩余正常饲养至第32周结束时取材。检测大鼠肺功能潮气量(Tidal Volume,TV)、呼气峰流速(Peak Expiratory Flow,PEF)、50%潮气量呼气流量(50%Tidal Volume Expiratory Flow,EF50)；观察肺组织病理变化；测定支气管肺泡灌洗液(bronchio-alveoli lavage fluid, BALF)和外周血中白细胞(white blood cell,WBC)计数和中性粒细胞(P e r c e n t a g e o f neutrophils,NEU)比率；采用荧光直接标记法及流式细胞仪检测 BALF及外周血中 T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)及 CD4+CD25+表达。结果
　　1 一般情况
　　模型组大鼠精神倦怠,形体消瘦,饮水量、食量减退,活动少,垫料潮湿,大便溏薄等, 3个中药组(补肺健脾组、补肺益肾组和益气滋肾组,下同)和氨茶碱组可在不同程度改善上述变化,其中以补肺健脾组和补肺益肾组较为明显。各组大鼠的体重随周龄增长逐渐增加。模型组体重增长趋势向较对照组缓慢( P>0.05)。第 12周起 3个中药组和氨茶碱组体重自增长趋势较模型组加快( P>0.05)。
　　2 肺功能
　　模型组 PEF、TV、EF50 水平从第 4 周开始较对照组明显降低(P<0.05, P<0.01)。与模型组相比, 3 个中药组自 16 周开始即可明显改善 EF50 和 PEF水平(P<0.05,P<0.01),TV值自 20周开始明显升高(P<0.05,P<0.01)；仅在第 20周和第 28周时,氨茶碱组 PEF值显著升高( P<0.05)。在 32周观察期间,3个中药组和氨茶碱组间 PEF、TV、EF50水平无显著差异(P>0.05)。3 外周血中WBC计数及中性粒细胞比率
　　第 2 0、3 2周,对照组模型组外周血WBC计数和中性粒细胞比率较有升高趋势,但无显著统计学差异(P>0.05)。
　　4 肺泡灌洗液中WBC计数及中性粒细胞比率
　　第 20、32周,模型组 WBC计数均较对照组明显升高( P<0.01),3个中药组均较模型组显著降低( P<0.01),补肺健脾组较氨茶碱组均明显降低( P<0.05, P<0.01)；第 20周时,氨茶碱组较模型组降低显著( P<0.05)；第 32周时,氨茶碱组无显著差异( P>0.05),补肺益肾组和益气滋肾组降低明显( P<0.05)。3 个中药组间无统计学差异( P>0.05 )。各组间中性粒细胞比率无明显差异(P>0.05)。
　　5 肺脏病理损伤评分
　　第 20、32 周时,模型组肺组织病理损伤程度评分较对照组明显升高(P<0.01),3个中药组和氨茶碱组较模型组明显降低(P<0.01)；第 32周时, 3个中药组较氨茶碱组降低( P<0.05,P<0.01),补肺健脾组较益气滋肾组肺组织病理损伤程度评分明显降低( P<0.05)。
　　6 外周血中 T淋巴细胞亚群( CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)及 CD4+CD25+
　　第 20、32 周时,模型组外周血中 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+水平较对照组明显降低( P<0.05,P<0.01),3个中药组和氨茶碱组外周血中 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+水平较模型组升高( P<0.05, P<0.01)；3 个中药组外周血中 CD3+水平较氨茶碱组明显升高(P<0.05,P<0.01)；补肺健脾组外周血中 CD4+较补肺益肾组和益气滋肾组明显升高( P<0.01)。第 20周时,3个中药组外周血中 CD4+水平较氨茶碱组明显升高( P<0.05,P<0.01)；模型组外周血中 CD4+/CD8+水平较氨茶碱组升高( P<0.05),补肺健脾组 CD4+/CD8+水平较益气滋肾组和氨茶碱组升高( P<0.05,P<0.01)。第 32周时,补肺健脾组和补肺益肾组外周血中 CD4+水平较氨茶碱组升高(P<0.05,P<0.01)；模型组外周血中 CD4+/CD8+水平较对照组明显降低(P<0.01),3 个中药组和氨茶碱组CD4+/CD8+水平较模型组升高( P<0.05),补肺健脾组 CD4+/CD8+水平较氨茶碱组升高( P<0.05)。
　　7 BALF中 T淋巴细胞亚群( CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)及 CD4+CD25+
　　第 20、32周时, 模型组 BALF中 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+水平较对照组明显降低(P<0.05,P<0.01),3 个中药组和氨茶碱组 BALF 中 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+水平较模型组明显升高( P<0.05, P<0.01)；3 个中药组 BALF中 CD3+较氨茶碱组明显升高( P<0.05,P<0.01)；补肺健脾组 BALF中 CD4+较补肺益肾组和益气滋肾组明显升高( P<0.01)。第 20 周时,补肺健脾组和补肺益肾组 BALF中 CD4+水平较氨茶碱组明显升高( P<0.01)；模型组BALF 中 CD4+/CD8+水平较氨茶碱组升高( P<0.05),补肺健脾组 CD4+/CD8+水平较益气滋肾组和氨茶碱组升高(P<0.05,P<0.01)。第 32周时,补肺健脾组和补肺益肾组 BALF中 CD4+水平较氨茶碱组升高(P<0.05,P<0.01)；模型组 BALF 中 CD4+/CD8+水平较对照组明显降低( P<0.01), 3 个中药组和氨茶碱组 BALF 中 CD4+/CD8+水平较模型组升高( P<0.05, P<0.01),补肺健脾组BALF中 CD4+/CD8+水平较益气滋肾组和氨茶碱组升高( P<0.05)。
　　8 相关性分析
　　第 20周时,肺组织病理损伤程度与外周血中 CD3+( r=-0.560,P=0.000)、外周血中 CD4+( r=-0.541,P=0.001)、外周血中 CD8+( r=-0.563,P=0.000)、外周血中 CD4+CD25+(r=-0.410,P=0.013)呈显著负相关；肺组织病理损伤程度与 BALF中 CD3+(r= - 0.564,P=0.000)、BALF中 CD4+(r= - 0.531, P=0.001)、BALF中CD8+( r=-0.564,P=0.000)、BALF中CD4+CD25+( r=-0.398, P=0.016)呈显著负相关。第 32 周时,肺组织病理损伤程度与外周血中 CD3+( r=-0.747,P=0.000)、外周血中 CD4+( r=-0.719,P=0.000)、外周血中 CD8+( r=-0.710,P=0.000)、外周血中 CD4+/CD8+( r=-0.576,P=0.000)、外周血中 CD4+CD25+( r=-0.666,P=0.000)呈显著负相关；32周肺组织病理损伤程度与 BALF中 CD3+(r=-0.749,P=0.000)、BALF中 CD4+(r=-0.720,P=0.000)、BALF中CD8+(r=-0.702,P=0.000)、BALF中CD4+/CD8+(r=-0.617,P=0.000)、BALF中 CD4+CD25+(r= - 0.692,P=0.000)呈显著负相关。
　　结论
　　1补肺健脾方、补肺益肾方和益气滋肾方可以明显改善COPD稳定期大鼠一般状况及肺功能、肺组织病理损害,具有显著疗效和远后效应。
　　2 补肺健脾方、补肺益肾方和益气滋肾方对COPD大鼠具有较好的疗效和远后效应,其机制可能与调节细胞免疫功能有关,在改善肺组织病理损伤及提高 T 淋巴细胞亚群( CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)及 CD4+CD25+表达等方面尤为突出。
　　3 3个中药方剂治疗COPD的疗效和远后效应均明显优于氨茶碱,且以补肺健脾方、补肺益肾方尤为显著。

目录

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声明

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中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 模型制备

3 分组与处理

4 标本处理与指标测定

5 统计学方法

结果

1 一般情况

2 肺功能

3 外周血中 WBC计数和中性粒细胞比率

4 BALF中 WBC计数和中性粒细胞比率

5 肺脏病理

6 T淋巴细胞亚群

8 相关性分析

讨论

1 中医学对 COPD稳定期的认识

2 现代医学对 COPD稳定期细胞免疫功能的认识

3 调补肺肾三法对大鼠整体状况的影响

4 调补肺肾三法对大鼠肺功能的影响

5 调补肺肾三法对大鼠肺组织形态学及肺损伤评分的影响

6 调补肺肾三法对大鼠细胞免疫功能的影响

结论

致谢

参考文献

附录1 病理照片

附录2 流式细胞术检测T淋巴细胞亚群图片

附录3 文献综述