积雪草及益肾康颗粒对 TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞 MCP-1及 HGF表达的影响

摘要

背景：肾小管间质纤维化(renal tubuleinterstitial fibrosis,RIF)是各种原因引起的慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)的共同通路和主要病理特征,是判断肾脏疾病预后的最重要的组织学指标。RIF的严重程度与肾功能衰竭密切相关。因此,探寻早期阻止和延缓 RIF 进展的新方法、新药物具有十分重要的意义。肾小管上皮细胞-肌成纤维转分化(tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation,TEMT)被认为是RIF发生的重要机制之一。转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是TEMT的重要启动和调控因子。单核细胞趋化蛋白 l(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)是单核/巨噬细胞浸润的重要介质,活化的肾小管上皮细胞可分泌大量的MCP-1。MCP-1可上调 TGF-β1的表达,通过 TGF-β1/Smads信号转导途径,参与 TEMT 的发生,直接参与肾小管上皮细胞间质转分化。肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)是一种高效的多效性因子,对多种器官的不同类型细胞均有生物学作用[1]。肝细胞生长因子可以通过不同途径抑制肾小管间质纤维化进程。MCP-1、HGF 被认为可作为判断 RIF的发生、发展和 CKD 预后的重要指标,日益受到人们的关注。
　　目的：本实验研究积雪草及益肾康颗粒对 TGF-β1 诱导的肾小管上皮细胞中MCP-1、HGF及其mRNA表达的影响,探讨积雪草及益肾康颗粒对 RIF防治作用的可能机制,为临床上应用积雪草及益肾康颗粒防治 R IF提供理论依据。
　　方法：以福辛普利(蒙诺)为阳性对照,将体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)分为：①正常对照组；②TGF-β1刺激组；③积雪草小剂量组；④积雪草大剂量组；⑤益肾康小剂量组；⑥益肾康大剂量组；⑦蒙诺组。培养48h后取出,应用实时荧光定量PCR(realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR)技术和免疫细胞化学技术检测细胞MCP-1、HGF的mRNA及蛋白表达。每组实验重复三次。
　　结果：①与正常对照组相比,T G F-β1刺激组细胞从铺路石样上皮细胞向梭形肌成纤维细胞(MyoF)转变,免疫细胞化学染色可见大量胞浆 MCP-1 染色阳性细胞,而HGF染色阳性细胞显著减少；积雪草大剂量组、益肾康大、小剂量组及蒙诺组细胞形态变化不显著,蒙诺组细胞变化与益肾康大剂量组相似。②与正常对照组相比,药物干预组HGFmRNA表达显著升高(P﹤0.05),MCP-1mRNA表达显著降低(P﹤0.05)。③各治疗组 MCP-1/HGFmRNA 表达与 TGF-β1刺激组差异显著(P﹤0.05)；且其抗RIF作用与中药的剂量呈正相关,相同剂量益肾康颗粒较积雪草更明显；蒙诺组细胞变化与益肾康大剂量组相似。
　　结论：①积雪草及益肾康颗粒对 TGF-β1 诱导的体外培养的肾小管上皮细胞(NRK52E)MCP-1的高度表达有抑制作用,且呈明显的剂量依赖关系；②益肾康大剂量组抑制 MCP-1表达的效应与蒙诺相似；③益肾康大剂量组促进 HGF表达的效应与蒙诺相似；④积雪草及益肾康颗粒抗R IF作用与其剂量呈正相关,相同剂量益肾康颗粒较积雪草作用更明显；⑤积雪草及益肾康颗粒可以对抗TGF-β1诱导的 HGF 降低。由此推断,积雪草及益肾康颗粒的抗纤维化作用可能通过降低MCP-1的表达,上调HGF的表达而实现。

目录

封面

目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1实验材料

2实验方法

结果

1 细胞形态学的变化

2 积雪草及益肾康颗粒对TGF-β1诱导的NRK52E细胞HGF、MCP-1表达的影响

讨论

1 现代医学对RIF的研究

2 HGF及MCP-1在RIF中的作用

3 益肾康颗粒组方中积雪草、白芍、川芎现代药理研究

4积雪草及益肾康颗粒对TGF-β1诱导的NRK52E细胞MCP-1、HGF表达的影响

结论

致谢

参考文献

附录

附录1 图 片

附录2 综 述

附录3 在读期间论文论著和科研情况