盐酸戊乙奎醚对脂多糖介导的A549细胞损伤及功能性蛋白SP-A、SP-D表达的影响

摘要

目的：观察抗胆碱药物盐酸戊乙奎醚（PHC）对脂多糖（LPS）所介导的A549细胞损伤及表面活性蛋白SP-A、SP-D表达的变化，并探讨其作用机制。
　　方法：采用A549细胞作为研究对象，实验共分为三组：○1空白对照组（C组）： A549细胞+DMEM培养液；○2脂多糖组（L组）： A549细胞+DMEM培养液+10mg/L脂多糖；脂多糖+戊乙奎醚组（L+P组）：○3 A549细胞+DMEM培养液+10mg/L脂多糖+5mg/L戊乙奎醚。培养一定时间后分别进行以下检测和观察（1）噻唑蓝(MTT)法药物敏感试验分别检测6h，12h，24h和36h各组A549细胞的OD值；（2）检测各组培养液中损伤因子乳酸脱氢酶（LDH）、碱性磷酸酶(ALP)、丙二醛(MDA)的表达情况；（3）用高倍显微镜观测各组细胞形态学改变；（4）利用流式细胞仪检测各组中A549细胞的周期及凋亡情况；（5）使用Rt-PCR技术检测各组中表面活性蛋白SP-A、SP-D的mRNA表达情况。（6）分别使用Western-blot和ELISA的方法检测各组中A549细胞裂解液中表面活性蛋白SP-A、SP-D的表达情况；
　　结果：（1）MTT检测结果：与C组比较，L组和L+P组的OD值明显降低；L+P组与L组比较，L+P组的OD值除6h外均明显升高。（2）损伤因子检测结果：L+P组乳酸脱氢酶及丙二醛的表达较L组明显降低。（3）细胞形态学改变：L组A549细胞与C组比较，体积扁小，外观偏圆，胞质呈空亮，在胞质内出现了大小不等的颗粒；加入PHC干预后的L+P组A549细胞表现有所改善。（4）细胞的周期及凋亡情况：与C组比较，L组细胞的增殖活性明显降低，细胞的凋亡率也明显增加，S期细胞比率下降，G0/G1期细胞的比率升高；与L组比较，L+P组细胞存活率升高，细胞凋亡率下降，G0/G1期细胞比率降低，G2/M期细胞比率均增加。（5）Rt-PCR结果：与L组比较，L+P组表面活性蛋白SP-A、SP-D的mRNA表达显著增强。(6)Western-blot与ELISA结果：与L组比较，L+P组SP-A、SP-D的表达显著增强，细胞裂解液中蛋白的含量明显增高。
　　结论：抗胆碱药物PHC能够抑制LPS对A549细胞的损伤，并使表面活性蛋SP-A、SP-D的表达增强，SP-A，SP-D可能参与了PHC对A549细胞损伤的保护。

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前言

1材料与方法

1.1 材料

1.2主要试剂的配制

1.3 细胞系及细胞培养和分组：

1.4噻唑蓝（MTT）法药物敏感性实验

1.5观察模型形态学的表现

1.6细胞因子检测

1.7流式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡

1.8肺表面活性蛋白SP-A、SP-D基因蛋白的表达

1.9 mRNA的检测

2结果

2.1.MTT法药物敏感试验

2.2 细胞因子检测:

2.3 细胞形态学观察：

2.4 流式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡

2.5蛋白表达结果

2.6 mRNA 表达结果

3讨论

结论

参考文献

综述: 盐酸戊乙奎醚用于急性肺损伤的前景

致谢

攻读学位期间发表的学术论文