低渗透压通过促进板状伪足的形成加速细胞缺口的关闭

摘要

目的:通过PDMS微柱法建立细胞伤口愈合模型，通过对比等渗透压，研究低渗透压对细胞缺口愈合的影响，研究低渗透压对细胞迁移速度、细胞肌动蛋白环及板状伪足的影响，并对低渗透压对细胞缺口关闭的作用机制进行初步探讨。
　　方法:实验细胞MDCK细胞（犬肾上皮细胞），随机分为低渗组(n=5)和等渗组(n=6)作延时拍摄观察细胞运动;用深反应离子刻蚀法制作好圆形微阵列凹槽的硅片板，深100μm，直径180μm。往硅片板上灌注1∶10PDMS，加热后切下即可造好PDMS微柱模具。消毒PDMS微柱模具后，往模具下方种下MDCK细胞，待单层细胞长满后，拔出柱子即在单层细胞中造出直径180微米的缺口。活细胞工作站下(37℃，5％CO2)，显微镜下连续延时定点拍照，5分钟拍一张，获得图片后分析低渗透压(～150mOsm)和等渗透压(～300mOsm)条件下细胞缺口关闭速度、伪足面积伸出的情况。此外，MDCK细胞低渗透压和等渗透压条件下分别处理15分钟后，固定细胞，并做荧光染色，观察不同渗透压下细胞肌动蛋白环的形成情况。
　　结果:细胞缺口关闭过程边缘曲线周长变化图中，可以看出低渗透下细胞缺口关闭比等渗压下要快。计算速度后发现，低渗组细胞愈合速度3.93±1.04μm/min(n=5，mean±s.d.)，等渗组细胞愈合速度1.76±0.18μm/min(n=6，mean±s.d.)。细胞缺口关闭过程伪足伸出边缘面积变化图中，可以看出低渗透压下板状伪足要比等渗压下的要明显，低渗压板状伪足伸出面积1137.46±70.26μm2(n=5，mean±s.d.)，等渗压板状伪足伸出面积60.44±21.87μm2(n=6，mean±s.d.)。等渗压下可见肌动蛋白环的形成，而低渗透压下几乎观察不到。荧光光密度分析曲线图中，等渗压下在缺口边缘出现了荧光光密度的波峰，而低渗透压下没有出现。
　　结论:1、低渗压环境下，MDCK细胞伤口愈合速度比等渗透压下的更加快。低渗透压下的板状伪足比等渗透压下的更明显，而低渗透压下没有形成肌动蛋白环。
　　2、低渗透压下，加速细胞缺口的关闭可能机制是通过促进板状伪足的形成。
　　3、在细胞缺口关闭过程中，板状伪足对关闭速度的影响比肌动蛋白环的影响更大。

目录

声明

个人简历

摘要

前言

参考文献

第一章、实验材料与方法

1．实验材料

2．实验方法

第二章、实验结果

1、低渗透压组和等渗透压组愈合速度

2、低渗组和等渗组伪足面积

3、低渗组和等渗组肌动蛋白环

第三章、讨论与分析

第四章 结论与展望

4．1 结论

4．2 不足和展望

参考文献

缩略词表

综述 细胞缺口关闭机制的研究进展

致谢