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大鼠间充质干细胞在小鼠体内分化发育的研究

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前言

第一章大鼠间充质干细胞的分离培养及鉴定

1大鼠间充质干细胞的分离培养

1.1材料

1.2方法

1.3结果:

2大鼠间充质干细胞的鉴定

2.1材料

2.2方法

2.3结果

2.4结论

参考文献:

第二章 大鼠间充质干细胞嵌合体小鼠的建立

2.1材料

2.2方法

结果:

参考文献:

第三章 大鼠间充质干细胞在嵌合体鼠体内的分布

讨论:

全文小结

英文缩略词表

致谢

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摘要

干细胞是存在于从早期胚胎到成人的多种组织中,可以自我更新和具有分化潜能的细胞。包括胚胎来源的胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)和成体来源的成体干细胞(Adult stem cells,ASC)。骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)是少数能在体外大量扩增的.ASC之一。,近年来倍受关注。MSC不仅对人类发育生物学研究有重要的科学价值,更重要的是它可以作为临床细胞治疗和人工组织或器官构建的种子细胞,在肿瘤、各种退行性疾病治疗及创伤修复、组织或器官的功能重建、基因治疗等方面发挥作用。 MSC细胞治疗的临床试验主要集中在神经系统、循环系统、骨关节和肌肉等一些缺血性疾病和退行性疾病的细胞治疗,少数研究者将它用于一些遗传性疾病如成骨不全症、异染性脑白质营养不良和Hurler综合征的治疗。干细胞治疗的基础是当干细胞到达损伤或缺损部位时,可以分化成有特定功能的组织细胞。有足够的实验证据说明MSC可以分化成一些特定组织的细胞,但关于使干细胞原位分化的特殊信号的报道目前甚少。虽然临床前和临床试验的结果表明MSC治疗安全而有效,但关于它还有许多问题不明:骨髓间质干细胞究竟可以分化成哪些种类的细胞?为什么会出现归巢现象?分化的机理有哪些?微环境对其分化的影响机制是什么?对于这些问题的研究成果将对MSC的应用具有关键性的作用。 目前对于这些问题的研究策略主要有以下几种:1).体外诱导分化体系;2).体内诱导分化体系;3).囊胚腔注射嵌合体动物方法;囊胚腔注射模型使干细胞暴露在发育过程中不同的胚胎细胞微环境下,可以为MSC提供分化成所有组织类型的环境,而且可以从胚胎到成体动物这整个过程研究MSC及其衍生细胞的分布分化情况,从而较全面地了解MSC的分化潜能,为MSC在组织工程等方面的应用提供启发和依据。 研究目的: 将MSC导入囊胚,暴露在不同的胚胎细胞微环境下,研究从胚胎到成体动物整个过程中MSC的分布分化情况,从而更全面了解其分化潜能,尤其是为研究干细胞分化潜能与受体本身发育程度的相关性、为MSC作为组织工程种子细胞应用于先天性疾病的基因治疗提供动物模型及理论依据。 研究方法: 1)MSC的分离培养; 2)将大鼠MSC注入小鼠囊胚腔,建立嵌合体鼠; 3)对嵌合体母鼠外源MSC分布状态检测; 结论: 1)成功原代培养大鼠MSC,并能持续传代,保持其未分化特性; 2)成功获得整合外源基因的嵌合体小鼠; 3)得到大鼠MSC导入早期小鼠囊胚中主要参与肝脏、骨髓组织的形成的证据,为MSC作为组织工程的种子细胞,具有多向分化潜能,同时为某些遗传性产前干预治疗提供理论依据。同时推知干细胞的分化发育还与受体本身分化发育程度密切相关。

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