复方中药有效成分抑制促炎症细胞因子诱导骨关节炎软骨细胞基质金属蛋白酶的基因表达

摘要

目的：骨关节炎(OA)是一种非常常见的关节疾病，在中老年人中发病频率最高。在大部分关节疾病中，软骨细胞的细胞和随后导致的组织细胞构成的减少，很有可能是软骨破坏病理过程中非常重要的一步。细胞因子IL-1β和TNF-α是软骨疾病的病理生理过程中尤为重要的因素。OA是关节软骨细胞外基质(ECM)降解的一种病理状态，导致ECM降解的主要原因是合成代谢(主要由TIMPs介导)与分解代谢(主要由MMPs介导)之间的失衡。邹学农教授等根据临床实践总结出的中药复方在临床治疗骨关节炎取得良好疗效，但是对其机制尚不清楚。因此本文研究此中药复方总提取物ZD-1(专利申请号：200810030338.6，专利公开号：101433600)对促炎症细胞因子刺激或不刺激的OA软骨细胞和SW1353的增殖作用和MMPs基因表达情况。
　　 方法：OA膝关节置换切除关节软骨，体外消化、分离、培养。CCK-8法检测中药总提取物ZD-1对I L-1β和TNF-α刺激或不刺激的OA软骨细胞和SW1353的增殖作用。SYBR Green Ⅰ定量PCR法检测ZD-1对IL-1β 和TNF-α刺激或不刺激的OA软骨细胞和SW1353 MMP-1，MMP--3，MMP-13，ADAMTS-5和TIMP-1的表达作用。应用SPSS13.0统计软件进行数据处理，各组间均数比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，P＜0.05表示差异有统计学意义。
　　 结果：消化后的原代(P0)软骨细胞生长良好但缓慢，适合进行下一步实验。浓度为6.25-200ug/ml的ZD-1促进OA软骨细胞和SW1353增殖。ZD-1在高浓度(＞500ug/m1)时对OA软骨细胞没有毒性。浓度为100ug/ml的ZD-1显著地抑制IL-1β刺激的OA软骨细胞MMP-1和MMP-13的表达，并且显著的抑制TNF-α刺激的OA软骨细胞MMP-3的表达。浓度为100ug/ml的ZD-1显著降低TNF-α刺激的SW1353 MMP-13的表达，显著降低IL-1β刺激的SW1353 MMP-3的表达。
　　 结论：低浓度的中药提取物ZD-1促进OA软骨细胞和SW1353细胞增殖，高浓度的ZD-1对OA软骨细胞和SW1353没有毒性。中药提取物ZD-1可抑制促炎症细胞因子刺激的OA软骨细胞和SW1353 MMPs的表达，增强TIMP-1的表达，具有保护软骨的作用。此复方中药有望成为治疗骨关节炎的有效药物。

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基质金属蛋白酶(MMPs)的研究进展

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