内质网应激通过调控巨噬细胞向M1方向极化产生致炎作用的实验研究

摘要

目的：脓毒症（sepsis）是常见的致死原因，其病理过程常伴随严重的炎症反应，已有学者发现脓毒症最常见的致病因素——脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）可通过诱导巨噬细胞向M1型极化进而产生炎症反应。内质网应激（Endoplasmic reticulum stress，ERS）是机体遭受到外界刺激（内毒素，缺氧等）时内质网产生的一个复杂的适应性反应，可通过调控多条炎症反应通路产生致炎作用。由于内质网应激和巨噬细胞极化均可控制炎症反应并且二者也有相似的诱发因素，因此二者是否存在关联是本实验探究的主要内容。
　　方法：第一部分实验用革兰阴性菌内毒素脂多糖腹腔注射造成炎症反应，6h后取小鼠肺组织，用western blot检测内质网应激相关蛋白eIF2α,p-eIF2α,IRE1α，p-IRE1α,p-IκB,XBP-1的表达量来判断脓毒症所致的炎症反应是否与内质网应激有关。第二部分实验将小鼠分为四组，取出其中两组分别注射内质网应激激动剂TM和内质网应激抑制剂TUDCA预处理30min，然后将处理后的两组和未处理的一组分别注射等量的LPS，最后一组注射PBS作为对照。通过流式细胞仪检测巨噬细胞M1的标记物iNOS的表达情况来判断巨噬细胞极化是否与内质网应激有关。第三部分实验取小鼠骨髓间充质干细胞用M-CSF定向诱导至巨噬细胞M0，然后用LPS刺激使其发生极化，然后用RT-PCR检测巨噬细胞M1因子IL-1,IL-12,iNOS,TNF-α的表达水平来检测极化的细胞是否为M1型。第四部分实验将定向诱导的巨噬细胞M0分为6组：M-CSF组；LPS组；LPS+TUDCA(50μg/mL)组；LPS+TUDCA(100μg/mL)组；LPS+TUDCA(200μg/mL)组,LPS+TG组。内质网应激激动剂TG和抑制剂TUDCA均需预处理30min。在体外条件下通过流式细胞仪检测巨噬细胞M1的标记物iNOS的表达情况来判断巨噬细胞极化是否与内质网应激有关并且观察巨噬细胞极化程度是否与内质网应激抑制程度有关。
　　结果：第一部分实验相较于对照组，实验组内质网应激相关蛋白eIF2α,p-eIF2α,p-IRE1α,p-IκB,XBP-1的表达量均升高。第二部分实验巨噬细胞M1的标记物iNOS在LPS组表达高于对照组(PBS组)；相较于LPS组内质网应激激动剂TM预处理组iNOS表达量增加，而内质网应激抑制剂TUDCA预处理组，iNOS表达量降低。第三部分体外实验用LPS诱导极化的巨噬细胞高表达IL-1,IL-12,iNOS,TNF-α四种巨噬细胞M1的标记物。第四部分实验巨噬细胞M1的标记物iNOS的表达量在LPS组,LPS+TUDCA(50μg/mL)组,LPS+TUDCA(100μg/mL)组,LPS+TUDCA(200μg/mL)依次递减，用内质网应激激动剂TG预处理组，iNOS表达量最高。
　　结论：通过体内体外实验证实在LPS所致的脓毒症模型中，内质网应激通过调节巨噬细胞向M1型极化产生致炎作用。

目录

声明

缩略词对照表

第一部分 内质网应激参与脓毒症反应进程

引言

实验材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 内质网应激可使巨噬细胞向M1方向极化

前言

实验材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 RT-PCR证实LPS诱导巨噬细胞向M1方向极化

引言

实验材料与方法

结果

讨论

参考文献

第四部分 LPS通过内质网应激促使巨噬细胞向M1方向极化

引言

实验材料与方法

结果

讨论

参考文献

结论

主要结论

研究展望

综述:内质网应激在脓毒症中作用的研究进展

在学期间的研究成果

致谢