miRNA-100在淮安地区食管鳞状细胞癌中的表达及其作用机制研究

摘要

目的：探讨江苏淮安地区食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）中miRNA-100的表达特征及其相关机制。
　　方法：采用Microarray流体芯片技术及荧光定量聚合酶链反应（quantitatie realtime Polymerase Chain Reaction，qPCR）技术检测ESCC癌组织及癌旁组织中miRNA-100表达；采用划痕实验、Transwell实验观察miRNA-100过表达/沉默后分别对ESCC细胞迁移、侵袭的影响；采用CCK8实验观察miRNA-100过表达/沉默后对ESCC细胞增殖的影响；采用流式细胞术观察miRNA-100过表达/沉默后对ESCC细胞凋亡的影响；通过miRBase、NCBI、UCSC Browser等在线工具分析miRNA-100序列特征；应用miRanda、TargetScan及PicTar预测miRNA-100的靶基因，并结合已证实的靶标基因，进行功能富集分析（Gene Ontology）和信号通路富集分析（Pathway Enrichment）；通过双荧光素酶报告系统检测mTOR是否为miRNA-100的下游直接靶基因，进一步采用Western Blot技术检测miRNA-100过表达/沉默后ESCC细胞中mTOR（mammalian target of rapamycin）蛋白表达水平进行验证。
　　结果：⑴流体芯片技术及qRT-PCR技术检测的结果均表明：淮安地区ESCC癌组织中miRNA-100表达水平显著低于癌旁组织（P<0.05）；⑵伴淋巴结转移组ESCC癌组织miRNA-100表达水平明显低于无淋巴结转移组癌组织（P<0.05）；⑶miRNA-100过表达可以明显抑制ESCC细胞迁移和侵袭，而miRNA-100沉默则对ESCC细胞迁移和侵袭具有促进作用；⑷miRNA-100过表达/沉默对ESCC细胞增殖和凋亡均无明显影响（P>0.05）；⑸miRNA-100在各物种之间具有高度保守性，其靶基因功能分别富集于基因沉默、染色体沉默、细胞生物合成的负性调节等生物学过程（P<0.001），涉及肿瘤信号通路、溶酶体信号通路、凋亡信号通路等信号转导通路（P<0.05）；⑹双荧光素酶报告系统及其Western Blot进一步检测的结果均表明：mTOR为miRNA-100的直接靶基因。
　　结论：①淮安地区ESCC癌组织中miRNA-100表达水平显著低于癌旁组织，且与肿瘤的转移密切相关；②miRNA-100可能通过调控mTOR蛋白表达参与ESCC的病理机制。

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中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1. 研究对象

2. 细胞

3. 主要仪器与试剂

4. 实验方法

5. 统计学处理

实验结果

1. Microarray芯片检测ESCC中异常表达的miRNA

2. miRNA-100与ESCC分化和转移的关系

3. miRNA-100过表达对ESCC细胞迁移、侵袭、增殖和凋亡的影响

4. miRNA-100沉默对ESCC细胞迁移、侵袭、增殖和凋亡的影响

5. miRNA-100参与ESCC发病的机制研究

讨论

结论

参考文献

致谢

附录

A.英文词汇对照

B.常用试剂配制

C.个人简历及发表文章

D.综述: miRNA-100的研究进展