在胃癌细胞中PKM2通过E-Cadherin依赖的方式双向调节EGF/EGFR信号通路

摘要

背景和目的:EGFR的激活和PKM2的表达有助于肿瘤的形成和发展。EGFR激活是以亚室依赖性的方式调节了PKM2的功能并且促进了基因的转录和肿瘤的生长。此外，在恶性神经胶质瘤中，EGFR诱导的信号上调了PKM2的表达。然而，我们发现在胃癌细胞中PKM2也能调节EGF/EGFR信号通路的活性。我们的研究目的是想明确PKM2在调节胃癌细胞迁移和侵袭功能方面的生物学机制。
　　 方法:我们采用短发夹RNA转染BGC823、SGC7901和AGS这三株胃癌细胞株，最后通过筛选稳定沉默PKM2的表达。我们用体外实验评估了PKM2对肿瘤细胞的迁移和侵袭方面发挥的作用。免疫组织化学分析是用来探索PKM2和其他蛋白的关系。
　　 结果:我们的结果提示:沉默PKM之后，在E-cadherin表达阳性的胃癌细胞株BGC823和SGC7901中，E钙蛋白(E-cadherin)的活性降低并且EGF/EGFR信号通路信号的传导增强;然而，在E-cadherin表达阴性的胃癌细胞株AGS细胞中，沉默PKM2之后细胞的的迁移和侵袭能力减弱。免疫组织化学法分析显示:E-cadherin的表达水平、ERK1/2的磷酸化水平和胞质内PKM2的表达水平，这三者彼此相关。
　　 结论:PKM2可能在不同分化程度的胃癌细胞类型中发挥着不同的作用，这和以往的临床研究是一致的。我们的研究结果还发现了:在EGFR激活介导胃癌细胞运动过程中PKM2和E-cadherin是有着重要联系的。

目录

声明

摘要

第一章 前言

1．1 M2型丙酮酸激酶

1．1．1 M2型丙酮酸激酶(PKM2)的发现及亚型

1．1．2 PKM2与肿瘤的代谢

1．1．3 PKM2作为一种辅转录激活蛋白参与信号传导

1．2 E钙粘蛋白(E-CADHERIN)

1．2．1 E钙粘蛋白(E-cadherin)的结构和功能

1．2．2 E钙粘蛋白(E-cadherin)与肿瘤

1．3 表皮生长因子受体(EGFR)

1．3．1 EGFR的结构

1．3．2 EGFR与信号通路

1．4 实验设计

1．4．1 实验基本思路示意图

1．4．2 实验基本步骤

第二章 材料与方法

2．1 相关稳转细胞系的建立

2．1．1 材料

2．1．2 方法

2．2 稳转细胞功能学研究

2．2．1 材料

2．2．2 方法

2．3 PKM2参与细胞信号通路调控的研究

2．3．1 材料

2．3．2 方法

2．4 胃癌标本免疫组织化学染色

2．4．1 材料

2．4．2 方法

第三章 结果与分析

3．1 在BGC823和SGC7901细胞株中，EGF刺激下沉默PKM2基因后能促进细胞的迁移和侵袭

3．1．1 结果

3．1．2 小结

3．2 沉默PKM2后E-Cadherin表达下降，EGF／EGFR下游信号通路PLC-γ1和ERK1／2的活性增强

3．2．1 结果

3．2．2 小结

3．3 沉默PKM2后减弱了AGS细胞的运动性，而在胃癌细胞中重新表达PKM2后功能学则发生了改变

3．3．1 结果

3．3．2 小结

3．4 PKM2提高了AGS细胞中EGF／EGFR下游信号通路的活性并且在胃癌样本中发现PKM2和ERK活性相关

3．4．1 结果

3．4．2 小结

第四章 讨论与展望

4．1 胃癌转移分子机制的研究现状

4．2 我们的研究

4．3 展望

参考文献

英文缩略词表

致谢