基于NF-κB与COX-2信号的艳山姜挥发油对LPS诱导血管内皮细胞损伤保护作用的实验研究

摘要

自卡萨尼丝提出“人与动脉同寿”的观点，血管内皮细胞生理功能与病理的变化成为人类健康研究的热点之一。大量研究结果证实，心血管系统疾病的发生和发展与血管内皮细胞损伤密切相关，而炎症反应是内皮细胞损伤关键的病理机制。民族药艳山姜为姜科山姜属植物艳山姜Alpiniazerumbet（Pers.)Burtt et Smith的干燥成熟果实，贵州民间广泛用于心血管系统疾患的防治。实验室前期研究证实，挥发油（EOFAZ）是其主要药效部位之一，具有抗炎、改善血管内皮功能及氧化应激状态等药理作用。
　　目的：研究艳山姜挥发油（EOFAZ）对脂多糖(LPS)诱导的人主动脉内皮细胞(HAEC)损伤的保护作用，并进一步阐明其对NF-κB及COX-2信号的调控，为其临床应用提供实验基础与理论指导。
　　方法：本实验以传代培养4-5代的人主动脉内皮细胞（HAEC，ScienCell）为研究对象。观察不同浓度EOFAZ（低剂量：50ng/ml；高剂量：100ng/ml）对脂多糖（LPS，1μg/ml）诱导炎症损伤的保护作用，同时选取阿托伐他汀（Atv，5μM）、阿司匹林（Asp，2mM）作为阳性对照药。通过MTT法、LDH外露率、Giemsa染色和HE染色判断HAEC损伤；Tunel染色观察EOFAZ、Atv、Asp对LPS诱导HAEC凋亡的保护作用；RT-PCR检测EOFAZ、Atv、Asp对LPS诱导HAECICAM-1、COX2 mRNA表达的影响；蛋白免疫印迹法（Western blotting）分析EOFAZ、Atv、Asp对LPS诱导HAEC NF-κB激活及对COX-2表达的影响。
　　结果：MTT实验结果表明，LPS（1μg/ml）处理12h后OD值明显下降，而EOFAZ（50ng、100ng）、Atv（5μM）、Asp（2mM）干预后OD值明显升高；LDH外露率实验结果提示，LPS（1μg/ml）处理12h后，LDH外露率明显提高，各组药物干预后LDH外露率明显降低；tunel染结果表明，LPS（1μg/ml）处理12h后tunel染色阳性细胞数增加（细胞核呈黄褐色），苏木素复染后蓝紫色细胞明显减少，而各组药物干预后tunel染色阳性细胞明显减少。LPS（1μg/ml）可诱导HAEC ICAM-1、COX2 mRNA及蛋白表达上调；NF-κB p65磷酸化增加、IκBα降解增多。EOFAZ（50ng、100ng）、Atv（5μM）、Asp（2mM）对LPS诱导的HAEC损伤具有不同程度的保护作用：①各组药物干预后细胞活力增加、凋亡细胞减少；②各组药物干预后均可抑制ICAM-1 mRNA及蛋白的表达；③EOFAZ（50ng、100ng）、Asp（2mM）降低COX-2 mRNA及蛋白的表达；④EOFAZ（50ng、100ng）、Atv（5μM）、Asp（2mM）均抑制 NF-κB激活，稳定 IκBα，EOFAZ具有一定的剂量正相关性。
　　结论：LPS诱导HAEC损伤与NF-κB及COX-2信号密切相关；EOFAZ对LPS诱导的血管内皮细胞炎性损伤具有保护作用，其作用机制可能与稳定 IκB、抑制NF-κB p65磷酸化以及抑制COX2表达有关。

目录

中文摘要

前言

1 材料与方法

1.1材料

1.2 方法

1.3 统计分析

3. 实验结果

3.1 HAEC形态

3.2 EOFAZ抑制LPS诱导的HAEC炎症损伤

3.3 Giemsa染色比较各组细胞形态

3.4 HE染色比较各组细胞形态

3.5 EOFAZ 对LPS诱导HAECs凋亡的影响--Tunel法

3.6 RT-PCR实验结果

3.7 EOFAZ对NF-κB及IκB的影响

3.8 EOFAZ对ICAM-1表达的影响

3.9 EOFAZ对COX-2表达的影响

4.讨论

4.1 LPS与VEC损伤

4.2 他汀类及环氧合酶抑制剂对LPS诱导的HAECs损伤的保护作用

4.3 艳山姜挥发油对血管内皮细胞炎性损伤的保护作用

5.结论

参考文献

英文摘要