冈田酸诱导细胞实验性阿尔茨海默病发生中PTEN的变化

摘要

目的：以细胞形态改变和tau蛋白过度磷酸化为反映AD(Alzheimer's Disease)发生发展的关键指标，初步探明实验性AD诱导产生过程中的P17EN变化状况及其与tau蛋白过度磷酸化的关系，以深化理解AD的发病机制。 方法：①采用冈田酸(Okadaic acid，OA)诱导SH-SY5Y细胞和NG108-15细胞，以细胞形态改变和tau蛋白过度磷酸化为观察指标，建立用于AD研究的细胞模型。②倒置显微镜观察细胞形态的变化。③Western blot法测定SH-SY5Y细胞和NG108-15细胞Ser<'396>位点磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平。④RT-PcR方法观测SH-SY5Y细胞PTEN mRNA水平。 结果：1-冈田酸诱导SH-SY5Y细胞AD样发生发展中PTEN的变化：①OA孵育SH-SY5Y细胞可显著改变细胞的形态，随OA孵育时间的延长，6 h后细胞开始变圆，突触缩回，18 h后细胞大部分变圆，突触消失，48 h后细胞漂浮生长，部分细胞呈死亡状态；40：nmol/LOA作用于细胞，Ser<'396>位点磷酸化tau蛋白水平在OA孵育后12 h显著升高， 18 h、24 h达高峰，之后下降，48h显著降低。提示OA可诱导SH-SY5Y细胞进行性损伤变性和tau蛋白过度磷酸化。②40 nmol/L OA孵育SH．SY5Y细胞，同时观测细胞中Ser<'396>位点磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平随OA作用时间的变化，可见Ser<'396>位点磷酸化tau蛋白水平变化同上，而PTEN蛋白水平则于3 h、6 h显著升高，6 h达高峰，之后下降，48 h显著降低。提示在OA诱导SH-SY5Y细胞AD样发生发展过程中，PTEN蛋白水平呈先升高后降低的变化。③40nmol/L OA作用于SH-SY5Y细胞，PTEN mRNA水平于12 h、18 h、24 h显著升高，其它时间点未见明显变化，提示在OA诱导SH-SY5Y细胞AD样发生发展过程中，PTEN mRNA水平存在着变化。2．冈田酸诱导NG108-15细胞AD样发生发展中．PTEN的变化：①OA孵育NG108-15细胞，随OA孵育时间的延长，6 h后细胞未见明显变化，18 h后细胞变圆，开始贴壁不牢，48 h后细胞呈悬浮生长，但胞壁完整；20 nmol/L OA作用于细胞，Ser<'396>位点磷酸化tau蛋白水平在OA孵育后6 h开始显著升高，18 h达高峰，48 h仍然显著升高。提示随OA孵育时间的延长，NG108-15细胞可发生进行性损伤变性，但由于孵育时间不够长，细胞并没有开始坏死；OA可诱导NG108-15细胞tau蛋白过度磷酸化。②20 nmol/L OA孵育NG108-15细胞，同时观测细胞中Ser<'396>位点磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平。随OA作用时间的变化，可见Ser<'396>位点磷酸化tau蛋白水平变化同上， PTEN蛋白水平则于12 h、18 h、24 h显著升高，18 h达高峰，其余时间点未见显著变化，提示在OA诱导NG108-15细胞AD样发生过程中，PTEN蛋白水平升高。 结论： 1．OA可诱导SH-SY5Y细胞、NG108-15细胞进行性损伤变性和tau蛋白过度磷酸化，这些细胞模型可用于AD研究。 2．在OA诱导SH-SY5Y细胞以及NG108-15细胞AD样发生过程中，PTEN蛋白水平升高，提示PTEN在实验性AD诱导产生中可能存在促进作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写字表

声明

前言

第一部分冈田酸诱导SH-SY5Y细胞AD样发生发展中PTEN的变化

材料和方法

结果

1 OA对SH-SY5Y细胞形态的影响

2 OA对SH-SY5Y细胞tau蛋白磷酸化水平的影响

3 OA诱导SH-SY5Y细胞tau蛋白过度磷酸化中PTEN蛋白水平的变化

4 OA诱导SH-SY5Y细胞产生AD样过程中PTEN mRNA水平的变化

讨论

小结

第二部分冈田酸诱导NG108-15细胞AD样发生发展中PTEN的变化

材料与方法

结果

1 OA对NG108-15细胞形态的影响

2 OA对NG108-15细胞tau蛋白磷酸化水平的影响

3 OA诱导NG108-15细胞tau蛋白过度磷酸化中PTEN蛋白水平的变化

讨论

小结

结论

参考文献

附录

致谢

综述