新生小鼠卵巢移植片培育MⅡ卵制备胚胎干细胞

摘要

目的：
　　1.建立从原始卵泡培育具有良好发育潜能的MⅡ卵的组织工程技术方案；
　　2.从原始卵泡培育MⅡ卵制备胚胎干细胞；
　　3.为人卵巢工程建立实验基础。
　　方法：
　　新生0.5d小鼠卵巢切片异体移植到成年母鼠肾被膜下，21天后对宿主腹腔注射PMSG10IU/只，给药44h后用机械穿刺法收获卵巢移植物中的卵冠丘复合体，再通过体外成熟培养16h，得到的IVM-MⅡ卵进行体外受精，受精卵发育至囊胚时从内细胞团制备小鼠胚胎干细胞，并对建立的干细胞系进行鉴定。
　　结果：
　　从移植切片卵巢所获COCs在体外成熟后得到IVM-MⅡ卵，可受精并发育至囊胚分离出ICM，成功制备1批胚胎干细胞并传至P4代，并通过畸胎瘤、碱性磷酸酶染色、SSEA-1和嵌合体实验对建立的胚胎干细胞完成鉴定。
　　结论：
　　本实验报道证实了新生鼠卵巢（卵泡募集前卵巢）切片异体移植联合体外成熟培养获得的成熟卵（MⅡ卵）具有很好的发育潜能，可供制备胚胎干细胞。为人废弃卵巢培育MⅡ卵并制备胚胎干细胞建立了实验模型。

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英文缩略词表

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前言

实验材料

一、 实验动物

二、实验设备

三、 实验试剂

四、 试剂配制

实验方法

一、 收获COCs用于体外成熟培养

二、IVM-MⅡ卵的体外受精及早期胚培养

三、成纤维细胞的制备、传代、冻存及冷冻复苏

四、ESC的建立以及鉴定

结论

参考文献

致谢

综述

参考文献