苏云金芽孢杆菌发酵液的浓缩及杀虫蛋白微胶囊化的研究

摘要

本研究对生物农药苏云金芽孢杆菌Bt lsz9408进行了气升式发酵，研究了发酵液的离心过滤工艺条件、壳聚糖絮凝浓缩工艺条件、复相乳液法制备Bt杀虫蛋白肠溶微胶囊的最佳工艺条件、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)蛋白质微胶囊包裹量的测定方法、杀虫蛋白的非肠溶性微胶囊、肠溶性微胶囊和非肠溶性微胶囊的释放特性等。 气升式发酵得到了晶体规则，数量多的发酵原液。离心过滤可以除去发酵原液中的大颗粒物质，有利于后续分离纯化工艺的进行，其最佳工艺条件为在每次处理量1L，温度10-15℃、pH4.5时过滤效果最好。采用壳聚糖进行絮凝浓缩，避免了化学絮凝剂、微生物絮凝剂对原药效果的影响，絮凝浓缩可除去约75％左右的水分及有色物质，其最佳工艺条件为：pH5.0-6.0、温度30-35℃、壳聚糖浓度0.025％、搅拌时间5min、550r/min；通过对发酵液分离纯化，得到等电点沉淀法提取的杀虫蛋白质比有机溶剂法的纯度高。 对测定HPMCP蛋白质微胶囊包裹量的方法研究中得到福林-酚法最适合测定。复相乳液法制备的肠溶式微胶囊形态多为圆形，并且没有粘结在一起的现象，最佳工艺条件为：分散质浓度为0.5％，搅拌转速6000r/min、囊壁材料浓度2％-3％、乳化剂用量为5％、芯材量4％、分散比为1：2.5-1：3.5。以乙基纤维素制备的非肠溶性微胶囊形态规则，不粘结在一起，通过对微胶囊释放特性研究得到：体外测定2-3h微胶囊释放量达到平衡，肠溶性微胶囊在偏碱性环境中释放速度快，而非肠溶性微胶囊则不受溶液的酸碱性影响。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章综述

1苏云金芽孢杆菌研究进展

1.1苏云金芽孢杆菌杀虫机理

1.2苏云金芽孢杆菌增效措施的研究进展

2微生物农药剂型及微胶囊剂型的研究进展

2.1微生物农药剂型介绍

2.2微胶囊剂型研究进展

3思路创新

第二章苏云金芽孢杆菌的絮凝浓缩研究

前言

1材料与方法

1.1试验材料

1.2 Bt的发酵

1.3发酵液的离心过滤

1.4发酵液的絮凝浓缩

1.5 CCl4两相法提取Bt蛋白质晶体

1.6等电点沉淀法提取Bt蛋白质

1.7 Bt蛋白质及其晶体的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

2结果与分析

2.1 Bt LSZ9408发酵特性

2.2 Bt LSZ9408发酵液离心过滤研究

2.3 Bt LSZ9408发酵液的絮凝浓缩工艺条件

2.4等电点沉淀法和两相法提取蛋白质纯度比较

3小结与讨论

3.1小结

3.2讨论

第三章 Bt杀虫蛋白的肠溶式微胶囊制备工艺研究

前言

1材料与方法

1.1供试材料

1.2复相乳液法制备微胶囊工艺流程

1.3复相乳液法制备HPMCP微胶囊不同保护性胶体的选择

1.4 HPMCP蛋白质包裹量测定方法的研究

1.5明胶作分散质肠溶式微胶囊制备工艺的研究

1.6羧甲基纤维素钠作分散质肠溶式微胶囊制备工艺的研究

1.7 HPMCP微胶囊形状观察及释放特性研究

2结果与分析

2.1保护性胶体物质的选择

2.2 HPMCP蛋白质微胶囊包裹量方法的确定

2.3明胶作分散质微胶囊制备工艺选择

2.4羧甲基纤维素钠作分散质微胶囊制备工艺条件

2.5 HPMCP微胶囊的释放特性

3小结与讨论

3.1小结

3.2讨论

第四章 Bt杀虫蛋白非肠溶性微胶囊的制备

前言

1材料与方法

1.1供试材料

1.2复合凝聚法制备Bt杀虫蛋白明胶-阿拉伯胶微胶囊

1.3 Bt杀虫蛋白的乙基纤维素微胶囊的制备

2结果与分析

2.1明胶-阿拉伯胶微胶囊的形态及溶解释放特性

2.2乙基纤维素微胶囊的形状及释放特性

3小结与讨论

3.1小结

3.2讨论

第五章总结与展望

1总结

2展望

参考文献

个人简历

致谢