microRNA let-7在意大利蜜蜂头部表达的研究

摘要

MicroRNAs(miRNA)是一种21-25nt长的单链小分子RNA，它们在各种细胞和发育过程中调节基因的表达，其中包括对衰老机制的调控。let-7是发现最早也是研究最为深入的microRNA之一，它具有很强的保守性，在许多动物和昆虫中都发现它的存在，它的表达具有组织特异性与时序性，现有的研究证明其功能涉及到神经系统的塑造、细胞的分化、发育的时序调控、细胞的阶段性死亡等。本试验首次研究了let-7在意大利蜜蜂工蜂和蜂王头部的表达情况，并对此进行了分析。试验结果如下： 1随着蜂王日龄的增加，let-7的相对含量逐步降低。降低幅度最大的时期是从1日龄到3个月的蜂王，数值从1下降到0.4，降低幅度为60％，随后的时期处于相对平稳状态。随着工蜂日龄的增加，let-7的相对含量逐步降低。1日龄、10日龄、20日龄、变化比较明显，值分别是1、0.65、0.49。1日龄工蜂头部let-7的相对含量比1日龄蜂王低44.6％。40日龄以后的工蜂头部let-7的相对含量也比2年蜂王的头部低21.5％。 2在持续热胁迫下，1日龄蜂王头部let-7的表达在48小时时下降了0.38。10日龄工蜂头部let-7在24小时时出现了一个下降，由1.00下降到了0.32，48小时时又有大幅度的升高，数值为2.93，到72小时时又出现下降，下降到了1.07。

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第一章文献综述

1 microRNA的生物学功能

1.1 microRNA对发育的调控作用

1.2 microRNA对肿瘤发生的影响

1.3 microRNA对细胞增殖和凋亡的影响

2 microRNA在衰老中的研究

2.1遗传与环境是衰老的两大动因

2.2 microRNA在低等动物衰老中的研究

2.3 microRNA在高等动物衰老中的研究

3 microRNA的生成与作用机制

3.1 microRNA的生成机制

3.2 microRNA的作用机制

4 miRNA的检测方法

5 microRNA let-7

5.1 let-7的生物学特征

5.2 let-7的作用机制与功能

6 let-7在蜜蜂研究中的展望

第二章研究思路与技术路线

1研究思路

2技术路线

第三章let-7在不同日龄蜜蜂头部的表达

1引言

2实验材料、试剂及仪器

2.1实验材料

2.2试剂及仪器

3试验方法

3.1对RNA进行抽提与检测

3.2引物设计、合成

3.3逆转录合成cDNA

3.4实时定量PCR

4结果与分析

4.1不同时期蜂王头部let-7相对含量变化

4.2不同时期工蜂头部let-7相对含量变化

4.3不同时期哺育蜂与采集蜂头部let-7相对含量变化

4.4不同时期蜂王与工蜂let-7相对含量变化的比较

5讨论

6本章小结

第四章热处理对蜜蜂头部蛋白羰基含量及let-7表达的影响

1引言

2实验材料、试剂及仪器

2.1试验材料

2.2试剂及仪器

2.3试验方法

3结果与分析

3.1工蜂和蜂王头部蛋白质羰基含量

3.2热处理对蜂王头部let-7相对含量变化的影响

3.3热处理对工蜂头部let-7相对含量变化的影响

4讨论

5本章小结

第五章讨论

第六章总结

参考文献

致谢