小鼠胚胎成纤维细胞对体外培养肺泡上皮Ⅱ型细胞干性的维持作用

摘要

目的:
　　1.了解小鼠胚胎成纤维细胞作为滋养层对肺泡上皮Ⅱ型细胞干性的维持作用。
　　2.建立肺泡上皮Ⅱ型细胞使用滋养层的体外培养及传代的技术方法。
　　3.了解白血病抑制因子在AT2细胞的体外培养中对其生长状态以及其干性维持的作用。
　　方法:
　　用10 ug/ml丝裂霉素C处理原代小鼠胚胎成纤维细胞(Mouseembryonic fibroblast cell，MEF)使细胞失去有丝分裂能力的同时保持细胞功能活性。用处理后的MEF作滋养层来培养肺泡上皮Ⅱ型细胞(Alveolar typeⅡ cells，AT2)，通过免疫荧光分别鉴定原代AT2细胞、传代后使用滋养层培养的AT2细胞，以及传代后不使用滋养层的AT2细胞。染色AT1标志物水通道蛋白5(Proteins-aquaporin5，AQP5)和AT2标志物肺泡表面活性蛋白C(Surfactant protein C，SPC)观察传代后使用了滋养层和未使用滋养层的AT2细胞染色情况，对比二者的不同。
　　结果:
　　1.传代后接种在MEF上的AT2细胞能够在培养第3天时形成克隆，并且能够连续传至第3代，而传代后未接种在MEF上培养的AT2细胞并没有形成铺路石样克隆生长，并且细胞生长形态扁平铺张。
　　2.免疫荧光鉴定显示传代后接种在MEF滋养层上的细胞为SPC阳性AQP5阴性，而未接种在MEF上培养的细胞为SPC阴性AQP5阳性。
　　结论:
　　使用丝裂霉素C处理的MEF作为滋养层培养AT2细胞能够在一定程度上维持AT2细胞的干性。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

结论

参考文献

附插图

文献综述 肺干细胞的分离及培养

致谢

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