白藜芦醇对氧糖剥夺/再复氧损伤后大鼠原代皮质神经元突起生长及突触发生的影响及机制研究

摘要

背景：神经元突起生长和突触发生是卒中后神经功能恢复的关键步骤。白藜芦醇（Resveratrol，Res）能促进神经元突起生长和突触发生，然而其机制尚未阐明。Sonic hedgehog（Shh）信号通路对胚胎、成人及脑缺血后的神经元突起生长和突触发生至关重要，但其是否介导白藜芦醇增强卒中后神经元突起生长及突触发生尚不清楚。此外，白藜芦醇是 Sirtuins1（Sirt1）的特异性激动剂，Shh信号通路是否与Sirt1相互作用？尚待阐明。
　　目的：探讨Shh信号通路是否介导白藜芦醇促进体外氧糖剥夺/再复氧（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation，OGD/R）损伤后神经元突起生长和突触形成，以及Shh信号通路是否与Sirt1相互作用。
　　方法：⑴为探讨白藜芦醇能否增强OGD/R损伤后神经元活力，实验分为5组：即正常组（normal，Norm），对照组（control，Ctrl），溶剂组（vehicle，Veh），白藜芦醇组(白藜芦醇1、5、20μmol/L，Res1、Res5、Res20)，空白组（Blank）；⑵为探讨 Shh信号通路是否介导白藜芦醇减轻OGD/R损伤、促进神经元突起生长和突触发生，实验分为6组：即正常组（Norm），对照组（Ctrl），白藜芦醇组（Res），白藜芦醇+环王巴明组（R+C），环王巴明组（cyclopamine，Cyc），Purmorphamine组（Pur）；⑶为探讨 Shh信号通路是否影响 Sirt1，实验分为5组：即正常组（Norm），对照组（Ctrl），白藜芦醇组（Res），环王巴明组（Cyc），Purmorphamine组（Pur）；⑷为探讨Sirt1是否影响Shh信号通路，实验分为4组：即正常组（Norm），对照组（Ctrl），白藜芦醇组（Res），Sirtinol组（Sirtinol）。CCK-8法测定细胞活力，TUNEL法检测细胞凋亡，免疫细胞化学染色和Western blotting检测神经元突起生长及突触发生。Western blotting检测生长相关蛋白-43（growth-associated protein-43，GAP43）、突触素（synaptophysin，SYP）、Shh、Ptc-1、Smo、Gli-1和Sirt1蛋白的表达。
　　结果：白藜芦醇预处理组与对照组相比，能明显增加ODG/R损伤后原代皮质神经元细胞活力（P=0.008），减少细胞凋亡（P=0.010），促进神经元突起生长（P=0.005；P=0.008）和突触发生（P=0.001；P=0.011）。Shh信号通路抑制剂环王巴明能明显抑制白藜芦醇对ODG/R损伤后神经元活力、凋亡、突起生长及突触发生的作用；而 Shh信号通路激动剂 Purmorphamine可产生与白藜芦醇相似的作用。白藜芦醇预处理能上调ODG/R损伤后Shh信号通路成分Shh、Ptc-1、Smo、Gli-1蛋白的表达。白藜芦醇和Purmorphamine可增加Sirt1蛋白的表达，而环王巴明则抑制Sirt1蛋白的表达；Sirt1抑制剂Sirtinol能抑制Shh、Ptc-1、Smo、Gli-1蛋白的表达。
　　结论：Shh信号通路可能介导白藜芦醇减轻原代皮质神经元的OGD/R损伤，促进神经元突起的生长和突触发生，且Shh信号通路可能与Sirt1具有相互作用。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物

1.1.2主要试剂

1.1.3主要仪器

1.2方法

1.2.1主要试剂的配制

1.2.2大鼠原代皮质神经元的培养

1.2.3神经元氧糖剥夺/再复氧（OGD/R）模型的建立

1.2.4实验分组及给药

1.2.5 CCK-8法测定细胞活力

1.2.6 TUNEL法检测细胞凋亡

1.2.7免疫细胞化学染色

1.2.8 Western blotting 检测蛋白表达

1.2.9统计分析

2结果

2.1大鼠原代皮质神经元的鉴定

2.2白藜芦醇增强OGD/R损伤后神经元活力

2.3 Shh信号通路介导白藜芦醇减轻OGD/R损伤，促进神经元突起生长和突触发 生

2.3.1 Shh信号通路介导白藜芦醇增强OGD/R损伤后神经元活力

2.3.2 Shh信号通路介导白藜芦醇减少OGD/R损伤后神经元凋亡

2.3.3 Shh信号通路介导白藜芦醇促进OGD/R损伤后神经元突起的生长

2.3.4 Shh信号通路介导白藜芦醇促进OGD/R损伤后神经元突触发生

2.3.5白藜芦醇对OGD/R损伤后神经元Shh、Ptc-1、Smo、Gli-1蛋白表达的影响

2.4 Shh信号通路与Sirt1的相互作用

3讨论

全文小结

参考文献

文献综述:Shh信号调控神经再生的研究进展

致谢

攻读硕士期间发表的文章