鸭卵清溶菌酶的分离纯化及部分性质与功能基团研究

摘要

溶菌酶(LysozymeEC3.2.1.17)又称胞壁质酶(Mucopetide),是一种葡糖糖苷酶,其切断细菌细胞壁肽聚糖中N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β-1,4糖苷键之间的联接,引起细胞内外渗透压不平衡,而使细胞裂解。溶菌酶广泛存在于高等动植物组织及分泌物、原生动物、昆虫和各种微生物中。它具有破坏细菌细胞壁的作用,因此它广泛应用于食品、医药、基因和细胞工程领域。
　　 主要结果如下:
　　 本文通过对新鲜鸭卵清进行磷酸盐缓冲液抽提,硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose阳离子柱交换层析、Superdex-200凝胶过滤等步骤,获得了电泳纯的溶菌酶,该酶的比活力达到33687.26U/mg,纯化倍数为109.44,回收率为28.00%。理化性质研究表明,鸭卵清溶菌酶的相对分子质量约为14.82kD,该酶的最适温度为50℃,最适pH值为7.0。在最适条件下,以不同浓度的溶壁微球菌为底物测得该酶的Km值为0.0864mg/mL。Zn2+、Cu2+、Co2+对鸭卵清溶菌酶有明显的激活作用,抗坏血酸、KSCN、Mg2+、Mn2+、对该酶有明显的抑制作用,SDS、Fe2+对该酶有强烈的抑制作用;甲醇、乙醇、异丙醇对鸭卵清溶菌酶都有一定的抑制作用,且抑制作用的大小都随着溶剂的体积分数的增大而增大,其中,甲醇对鸭卵清溶菌酶的抑制作用不明显,异丙醇对鸭卵清溶菌酶的抑制作用较大,乙醇对鸭卵清溶菌酶的抑制作用介于两者之间。
　　 化学修饰剂对该酶的功能基团进行修饰,发现氯胺-T、BrAc轻微抑制该酶活性,PMSF对酶有一些激活作用,PCMB、顺丁烯二酸酐、乙酰丙酮(BD)、二硫苏糖醇(DTT)对酶活性影响不大。