重症急性胰腺炎动物模型中内皮素受体拮抗剂对P-选择素和E-选择素表达的影响

摘要

背景和目的：重症急性胰腺炎(SAP)的发生机制十分复杂，现在比较公认的有以下几大学说：1.胰酶消化学说；2.细胞因子和炎症介质学说；3.微循环障碍；4.感染-第二次打击学说；5.白细胞过度激活学说。各种致病因素造成胰腺组织和细胞损伤，引起胰酶激活消化自身组织、炎症细胞浸润而释放大量炎症介质。其中血管活性因子导致微循环障碍加重局部组织损害，而血小板活化因子使肠壁通透性增加，上皮屏障功能丧失，使肠道内细菌移位至肠系膜淋巴结、腹腔、血循环中，加上细胞免疫功能的下降而发生内毒素血症。内毒素血症刺激巨噬细胞释放而引起高细胞因子血症，并使白细胞受趋化因子的吸引、粘附分子的介导下发生渗出与在器官的集聚，随后释放大量的酸性水解酶、弹力蛋白酶、各种氧自由基损害组织造成多器官功能衰竭。由此可见，抑制白细胞集聚与过度激活在治疗SAP中有着重要意义。现研究证实内皮素不仅是致SAP微循环障碍的重要因子，而且与白细胞介导的炎症有关联。其受体拮抗剂不仅可以纠正血流动力学改变、稳定毛细血管通透性和增加胰腺功能性毛细血管密度，而且可抑制白细胞滚动，但后者具体机制不清。白细胞滚动是白细胞渗出的前提，从理论上讲抑制了白细胞滚动就可减少白细胞渗出与集聚。由于白细胞滚动受血管内皮细胞表面表达的P-选择素和E-选择素(selectin)所介导，因此本实验构建SAP动物模型，研究内皮素受体拮抗剂(ET-RA)对P-selectin和E-selecitn表达的影响，从而探讨ET-RA抑制白细胞滚动的意义及相关机制，并为ET-RA进入临床实验提供更有力的理论基础与依据。 方法：①实验动物随机分为：正常对照组；SAP组；SAP+BQ123组(BQ123是一种特异性内皮素A型受体拈抗剂)。后两组又各分为24h、48h、72h、1周时段组；②采用胰腺实质内注射牛磺胆酸钠方法制作SAP动物模型，利用BQ123对模型进行干预；③利用血清淀粉酶、脂肪酶和光镜下组织病理学改变对SAP模型进行评价；④光镜下观察各组胰腺的白细胞浸润情况；⑤利用免疫组化SP方法检测血管内皮细胞膜上P-selectin、E-selectin表达水平；⑥利用RT-PCR的方法测定内皮细胞内P-selectin、E-selectinmRNA生成水平。 结果：①利用胰腺实质注射牛磺胆酸钠的方法，复制了SAP的大鼠模型，经血清学检测与组织学观察证实模型符合SAP诊断标准；②SAP+BQ123组组织损害与白细胞浸润较SAP组明显减轻，淀粉酶与脂肪酶明显下降(P＜0.01)；③通过RT-PCR、免疫组织化学法观察到，正常胰腺血管内皮细胞无selectin表达，而SAP组24小时P-selectin即呈现较强阳性表达，而E-selectin呈弱阳性表达，在48小时二者表达达到高峰，之后P-selectin表达水平缓慢下降，而E-selectin迅速下降。1周后P-selectin在胰腺仍呈较强表达，而E-selectin表达减弱甚至呈现阴性表达。SAP+BQ123组较SAP组可见selectin表达下调(P＜0.05)。 结论：①P-selectin与SAP长期维持炎症状态有关，E-selectin则可能是在炎症的早期起到一种辅助作用；②ET-RA可下调SAP胰腺血管内皮细胞selectin的表达；③ET-RA对SAP时胰腺有保护作用。

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摘要

前言

主要实验试剂和仪器

实验方法

结果

讨论

结论

致谢

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参考文献

文献综述一内皮素在急性胰腺炎微循环障碍中的研究

文献综述二内皮素和选择素在重症急性胰腺炎的作用及相互关系

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