HGF/c-Met对左向右分流继发肺动脉高压大鼠肺血管重构的影响

摘要

研究背景和目的
　　 左向右分流型先天性心脏病使肺循环长期处于高灌注状态,肺动脉管壁承受血流冲击的机械应力持续过度增加,致使内皮细胞(endothelial cell,EC)受损、平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)增生、肺血管管腔狭窄,肺血管发生重构(pulmonary vascularremodeling,PVR),形成肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)。PAH程度直接影响患者的治疗及预后,进入肺动脉高压晚期,治疗困难,预后不良。对于左向右分流型先天性心脏病PAH形成过程、机制、干预和预防的研究仍是值得研究的重要课题。
　　 近年来在缺血性心肌病方面的研究发现肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)具有较强的促血管内皮细胞增生,修复血管内皮作用。它通过促进血管内皮细胞分化、增生,保护血管内皮,具有抑制内皮细胞凋亡的作用,并可抑制纤维化反应。研究表明外源性HGF可促进兔心肌梗死后缺血部位的血管内皮细胞增生,修复受损的血管内膜防止血栓形成,并可促进形成新的微血管。原癌基因编码蛋白Met(mesenchymal-epithelial transition factor,c-Met)是至今唯一被认识的HGF高亲合力受体。目前,对损伤细胞修复和血管形成的作用和机制等方面的研究备受关注。
　　 HGF/c-Met在左向右分流肺动脉高压的肺组织的表达情况以及HGF/c-Met对此类肺动脉高压的肺血管重构有何影响仍不得而知,该问题值得研究。本课题建立左向右分流型PAH大鼠模型,并给予外源性的HGF,通过运用生理记录仪和病理学方法分别观察血流动力学和肺血管结构的变化,运用免疫组织化学、Western blotting等方法分析HGF、c-Met在左向右分流型PAH大鼠肺组织的表达,运用免疫组织化学方法检测半胱氨酸的天门冬氨酸蛋白酶-3(cysteine-aspartic proteases-3,Caspase-3)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在大鼠肺组织的表达,以及运用TUNEL法检测肺动脉平滑肌细胞的凋亡情况,从而研究HGF/c-Met对左向右分流型PAH大鼠肺动脉SMC的增殖与凋亡的调节作用以及对左向右分流型PAH的PVR的影响。
　　 本课题将为探讨左向右分流型PAH形成的机制及HGF/c-Met对左向右分流型PAH的PVR的影响提供实验依据及理论指导。
　　 方法
　　 本研究分为两部分
　　 第一部分:HGF/c-Met在左向右分流继发肺动脉高压大鼠肺血管中的表达及作用。雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机均分为对照组(Control Group),分流组(ShuntGroup)和HGF组(HGF Group),分流组及HGF组行套管法颈总动脉-颈外静脉分流术以建立左向右分流继发肺动脉高压大鼠模型,对照组行假手术,HGF组于术后第3天开始予腹腔注射HGF蛋白2mg/kg/日。分流组和HGF组分别于术后第4、8、12、16周行超声检查明确分流血管的通畅性,检测肺动脉压力、右心室肥大指数等;常规HE染色观察肺小动脉重构的病理变化,计算机图像分析系统测量肺动脉管壁厚度占外径的百分比(MT％);免疫组织化学和Western blotting检测HGF、c-Met蛋白在肺动脉的表达。
　　 第二部分:HGF/c-Met对左向右分流继发肺动脉高压大鼠肺血管平滑肌细胞凋亡和增殖的影响及意义
　　 免疫组织化学检测Caspase-3、PCNA蛋白在肺中等动脉的表达,Western blotting检测Caspase-3蛋白在肺组织的表达,脱氧核糖核苷酸末端转移酶缺口末端标记(TUNEL)法检测肺中等动脉SMC凋亡情况,计算机图像分析系统测量肺中等动脉中层凋亡细胞数占SMC数的百分比(apoptotic index,AI),及增殖细胞数占SMC数的百分比(proliferation index,PI)。
　　 结论
　　 1.套管法颈总动脉-颈外静脉分流术可造成大鼠类似左向右分流型先天性心脏病,可导致肺动脉压力持续升高,肺中等动脉管壁中层增厚,右心室肥厚等,藉此成功建立左向右分流继发肺动脉高压大鼠模型;
　　 2.左向右分流继发肺动脉高压大鼠肺组织中HGF、c-Met蛋白的表达与肺动脉压力及肺中等动脉管壁厚度百分比呈负相关;外源性HGF可有效提高HGF、c-Met蛋白在模型大鼠肺组织的表达,降低其肺动脉压力;
　　 3.左向右分流继发肺动脉高压大鼠肺中等动脉SMC增殖与凋亡失衡,促使肺动脉管壁增厚,导致肿血管重构,外源性HGF可调节SMC增生与凋亡平衡,抑制其过度增生,缓解肺血管重构。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩写词表

前言

第一部分 HGF/c-Met在左向右分流继发肺动脉高压大鼠肺血管中的表达及作用

材料

方法

结果

讨论

第二部分 HGF/c-Met对左向右分流继发肺动脉高压大鼠肺血管平滑肌细胞凋亡和增殖的影响及意义

材料

方法

结果

讨论

全文结论

致谢

照片

参考文献

文献综述:HGF/cMet与血管内皮损伤修复

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