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量子点荧光免疫法测定牛奶中氨苄青霉素残留的研究

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摘要

抗生素类兽药的不合理使用导致其在动物源性食品中蓄积残留,从而给人体健康带来潜在的危害。其中,氨苄青霉素(Ampicillin,AMP)在畜禽养殖业中大量使用,其所引起的抗生素残留问题不仅带来动物性食品的安全隐患,并且可通过食物链进一步危害人体健康。因此,建立更为快速、简便和有效的新型检测方法,对于有效监测动物性农产品中氨苄青霉素的含量具有重要的实践意义,也是保障农产品质量安全的关键措施。量子点(Quantum dots,QDs)具有独特的光学特性,近年来与荧光免疫分析技术相结合,广泛应用于兽药残留的检测。 本研究将Qdot655红色荧光量子点与二抗偶联物共价结合,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法和动态光散射仪检测法鉴定QDs-二抗偶联物,通过免疫荧光吸附法(fluorescence-linked immunosorbent assay,FLISA)对偶联之后二抗的活性进行了评估,同时探究pH、离子强度、溶液体系和温度对量子点二抗偶联物稳定性的影响,最终成功制备量子点-二抗偶联物。 在上述研究的基础上,依据传统酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)的反应原理,将QDs-二抗偶联物代替传统酶标二抗应用到检测牛奶中AMP残留检测的荧光免疫分析方法中,并将该方法与ELISA和高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)进行比较,从而评估QDs-二抗偶联物用于牛奶中AMP残留检测的可行性。结果显示,该方法的半数抑制浓度(50%inhibition value,IC50)为8.3μg/L,检测限为2.5μg/L。空白牛奶添加浓度为10、25、50和100μg/L时,此方法回收率为94.2%~106.2%,变异系数为2.1%~9.2%。在实际样品的检测中,将该法与ELISA方法测定的结果比较,相关性好(R2=0.9974),无显著差异(|t|=0.894,P>0.05);与HPLC方法测定的结果比较,相关性好(R2=0.9968),无显著差异(|t|=0.904,P>0.05)。 综上所述,本研究制备的量子点-二抗偶联物可以用于氨苄青霉素在牛奶中残留的检测,基本满足牛奶中AMP残留检测的要求,较传统的ELISA方法检测限较低,后续需要再优化反应条件以提高该方法的灵敏度。在实际应用中,可以同ELISA方法一样,用于样品的快速筛选,再用HPLC方法等其他仪器方法进一步定性定量分析。

著录项

  • 作者

    尹致丹;

  • 作者单位

    中国农业科学院;

  • 授予单位 中国农业科学院;
  • 学科 食品加工与安全
  • 授予学位 硕士
  • 导师姓名 樊霞;
  • 年度 2019
  • 页码
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 中文
  • 中图分类 肿瘤学;诊断学;
  • 关键词

    量子点; 荧光免疫法; 测定; 牛奶;

  • 入库时间 2022-08-17 10:21:23

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