重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗研究及应用

摘要

H5和H7亚型高致病性禽流感病毒(Highly pathogenic avian influenza virus，HPAIV)通常可导致感染家禽全部死亡，引起疫情的暴发。2003年以来，在全球60多个国家和地区暴发了H5亚型AI疫情。同时，H5和H7亚型AIV均能导致人发病和死亡，给人类健康带来严重威胁。疫苗免疫是适合我国国情的AI最有效防控措施之一。2014年以来，我国家禽中分离的H5亚型AIV主要属于2.3.4.4分支，国家禽流感参考实验室研制的H5N1亚型Re-8株系列灭活疫苗，已在家禽中广泛应用并取得了良好的效果。2017年初，我国人H7N9流感疫情增多，家禽中出现H7N9亚型HPAI疫情，迫切需要能够同时预防H5和H7亚型AI的禽AI疫苗。 本研究首先对H7N9H7-Re1疫苗株的病毒含量、毒力、免疫原性等生物学特性进行了系统鉴定。结果显示，该疫苗种毒生物安全度高、特异性强、免疫原性好且能在鸡胚中高效稳定增殖，是用于H7亚型HPAI防控的理想疫苗种毒。 其次，以H5N1Re-8株和H7N9H7-Re1株疫苗种毒为基础，研制出重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1Re-8株+H7N9H7-Re1株)（以下简称H5+H7二价灭活疫苗），进行了安全性和有效性的系统评估。将H5N1Re-8株和H7N9H7-Re1株鸡胚尿囊液分别2倍浓缩，使用甲醛灭活后，按照本研究确定的1∶1.5抗原比例乳化制备成H5+H7二价灭活疫苗。安全性试验结果表明，大剂量、单剂量和单剂量重复接种的SPF鸡在接种后14日内，无任何不良反应。该疫苗最小免疫剂量为0.1mL，免疫后3w H5和H7亚型HI抗体平均滴度均在6log2以上;肌肉与颈部皮下途径免疫SPF鸡，效力无明显差异，均可产生较高的抗体水平，高峰期(首免后4w)抗体水平即可达9log2，SPF鸡肌肉注射免疫后14d到210d均可获得完全保护;抗体与攻毒保护结果表明，免疫后3w H5和H7亚型HI抗体滴度达到3log2时可以获得抗死亡保护，达到4log2及以上时可获得完全保护。 最后，将H5+H7二价灭活疫苗免疫商品蛋鸡、商品白羽肉鸡、商品黄羽肉鸡、商品鹅以及商品肉鸭，进行田间试验。结果表明，该疫苗具有良好的安全性，免疫不同品种的家禽后均吸收良好，无局部或全身不良反应。该疫苗免疫蛋鸡后HI抗体可高达9log2左右(免疫后150d)，免疫持续期达150d，按程序免疫后，抗体更高，持续期更长;商品白羽肉鸡经一次免疫、商品黄羽肉鸡和商品肉鸭经二次免疫，上市前均能获得完全免疫保护。商品蛋鸭和种鹅按程序免疫，免疫后能产生良好的抗体，均可以抵御H5和H7亚型AI高致病性禽流感病毒的攻击。 本研究研制出H5+H7二价灭活疫苗，对鸡、鸭和鹅均具有良好的安全性和有效性。2017年9月，该疫苗开始在全国家禽中应用，已在预防家禽H5和H7亚型AI及成功阻断人感染H7N9病毒过程中发挥重要作用。