猪圆环病毒2型ORF2基因在PcDNA3.1中的表达效果

摘要

[目的]构建猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)ORF2 DNA核酸疫苗,并评价其免疫效果和安全性。[方法]设计一对特异性引物,扩增PCV2-ORF2,利用T载体对其进行克隆,与真核表达载体PcDNA3.1在同等条件下进行双酶切,并进行连接,转化感受态细菌DH5 α并克隆,经双酶切鉴定筛选阳性重组质粒,即DNA核酸疫苗,命名为PcDNA3.1-ORF2。将该核酸疫苗瞬时转染Vero细胞,通过ST-PCR鉴定其在细胞内的表达情况;并且将该核酸疫苗按100μg/只腿部肌肉注射免疫Balb/c小鼠,同时设PBS和PcDNA3.1空载体为对照,免疫2次,间隔2周.分别于首免后第14d和第28d采血,用ELISA方法检测其血清抗体.取首免后56d小鼠的心、肝、脾、肺、肾和脑等实质器官,采用PCR方法检测该核酸疫苗的安全性。[结果]成功地构建了PcDNA3。1-ORF2核酸疫苗,在体外Vero细胞中得到了瞬时表达,并且能诱导小鼠产生较强的免疫应答.安全性试验表明该核酸疫苗未整合到小鼠染色体上.[结论]PcDNA3。1-ORF2核酸疫苗可以诱导小鼠产生较强的免疫应答,并且是安全的。